微生物实验自己整理

《微生物实验自己整理》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、球菌（葡萄球菌，链球菌）杆菌（大肠杆菌）弧菌（霍乱弧菌）细菌染色法:革兰氏染色（葡萄球菌、大肠杆菌）3•细菌的基本形态观察球菌（葡萄球菌）杆菌（大肠杆菌）弧菌（霍乱弧菌）革兰染色1•制片2.初染3.媒染4.脱色5.复染6.镜检Notes:乙醇脱色时间是关键环节：脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌；脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。脱色时间一般为3・5s左右。注意：｛葡萄球菌Gramstain革兰染色方法:大肠杆菌干燥、固定流水冲洗标本初染（结晶紫1-3分钟〉>媒染（卢戈氏碘液30-60秒型瞬色（95%酒精3_5秒）竺些复率（沙黄go秒》流水冲洗油镜镜检阳性positive（紫兰色）阴性

2、negative（红色）革兰染色原理1细胞壁结构G+：细胞壁结构致密，肽聚糖层厚，脂质含量少1.球菌（葡萄球菌，链球菌）杆菌（大肠杆菌）弧菌（霍乱弧菌）2•记录革兰染色的实验原理和步骤G-：细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄，而外膜、脂蛋白、脂多糖等含有大量的脂质2.等电点3・细胞内含核糖核酸镁盐细菌形态观察：肉毒梭菌（革兰氏染色）、产气荚膜梭菌（荚膜染色）、淋球菌（革兰氏染色）、白喉杆（奈瑟氏染色）物理消毒与灭菌：紫外线对细菌的作用细菌耐药性检测与机制探讨细菌对抗生素敏感性试验致病性球菌的分离培养与鉴定（2）抗试验肠道菌的分离与鉴定：双糖铁培养基接种及初步鉴定产气荚膜梭菌（荚膜染色）油

3、镜下观察：为G+粗大杆菌,菌体稍短，两端钝圆，单个或成双存在,外围有一圈透明荚膜。淋球菌（革兰氏染色）油镜下观察：肾形或豆形G双球菌，两茵的接触面较平坦或略向内陷。白喉杆菌:细菌染色法2—奈瑟氏染色（白喉杆菌的异染颗粒）【方法】1、细菌涂片、干燥和固定。2、临用时将第一液l（）ml与第二液5ml相混合，将此混合液加入已固定的细菌涂片上，染1~2分钟，水洗；3、以第三液复染30秒〜1分钟，水洗,待干；4、油镜镜检。【结果】菌体呈黄褐色，极体呈兰紫色。紫外线对细菌的作用原理紫外线使DNA链上相邻的两个胸腺吨旋以共价键结合形成二聚体，干扰DNA的复制及转录，导致细菌的变异或死亡。紫外线

4、的穿透力低细菌对抗生素敏感性试验结果无抑菌圈一一不敏感抑菌圈为10mm低度敏感抑菌为10-20mm中度敏感抑菌圈＞20mm——高度敏感实验结果血凝板孔号123病人血7^1:4000.20.150.1磷酸盐缓冲液（PH6.5）0.050.1还原溶血索“0”0.10.10.12%兔红细胞悬液摇匀后放37C水浴箱15分钟0.10.10.1摇匀后放37°C水浴箱45分钟抗体单位4000533800个人操作4、细菌的血清学实验2抗％广试验•A族乙型链球菌产牛的溶血素“CT,在还原状态下有溶血作用。它是溶血性链球菌的代谢产物乙一，是一种含・SH基的蛋口质，能溶解红细胞，溶血素"0"的溶血力不

5、稳定，易因氧化而失去活力，在还原剂的作用下可以使其巫新激活而恢复其溶血力。•溶血素具有很强的抗原性，能和血淸内相应的抗体结合，人受溶血性链球菌感染后2—3周就能产生抗体，即抗链球菌溶血素O'抗体。此种能中和溶血素乂T的抗体,直到病愈后数月至余年才消失。•因此，当血淸内这种抗体效价显著增高时，表示机体近期曾受溶血性链球菌感染或反复溶血性链球菌侵害，比如风急性,斤小球炎等。双糖铁培养基原理：不同的肠道细菌对同一种糖的分解能力不同，非致病性的肠道杆菌能分解乳糖及葡萄糖；致病性的肠道杆菌不能分解乳糖。根抓这-特点，将葡萄糖和乳糖按-•定的比例（1：10）配制成双糖培养基，并在培养基屮加入

6、1%酚红酒精溶液。作业:L绘图：肉毒杆菌（革兰氏染色）、产气荚膜杆菌（荚膜染色〉＞淋球菌（革兰氏染色人白喉杆菌（奈瑟氏染色）2、紫外线对细菌的作用3•记录实验结果：细菌对抗生索敏感性试验.双椭铁试验4•记录抗O实验结果和诊断将肠道细菌接种至该培养基中，根据培养后结果初步鉴定肠道致病菌与非致病菌。葡萄糖：乳糖1:101%酚红酒精A：非致病菌B：致病菌Capsule荚膜（Streptococcuspneumoniae肺炎球菌）Flagellum鞭毛（Salmonellatyphi伤寒沙门菌）Spore芽胞（Closfri述iumtetani破伤风梭菌）Pilus菌毛4.Widalte

7、st肥达试验肠道菌SS平板划线分离双毛菌£学微生输学第二次卖捡从毛歯国毛菌Capsule荚膜（Streptococcuspneumoniae^炎球菌）Pilus菌毛金黄色葡萄球菌Staphpylococcusaureus1：K^S人血1・N各加牛理总水200微升农200微升「200«升0000001:201:401:801:1601:3201:63onbloodagarplates生理統水对照1:401：W!:1Wl:»01:MO1:I2«J1:25的弃去乳用曲开伤«ffB的o抗