杜仲内生真菌的分离及其鉴定

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1、杜仲内生真菌的分离及其鉴定摘要：从杜仲的根、茎、叶中分离得到80株内生真菌,经显微形态特征观察鉴定为14个属，其中根部33株涉及10个属，茎部26株涉及9个属，叶部21株涉及6个属。结果表明，杜仲的不同部位内生真菌的数量、分布和种群存有差异。关键词：内生真菌；分离；鉴定；杜仲中图分类号：Q93-33,S567・1+9文献标识码：A文章编号：0439-811404-0731-03IsolationandldentificationofEndophyticFungifromEucommiau1moidesSUNKui1,Abstract：Eightysofendo

2、phyticfungitedto14genuswereisolatedandmorphologicallyidentifiedfromtheroots,stemsandleavesofEucommiau1moidesOliv..Amongthem,33strainsof10generawereobtainedfromroots,26strainsof9generafromstems,and21strainsof6generafrom1eaves.Theresu1tsshowedthefactsthatthequantity,population,anddist

3、ributionoftheendophyticfungiwerevariedindifferenttissuesofEucommiau1moides・Keywords：endophyticfungi；isolation；identification；Eucommiau1moidesOliv.杜仲是我国独有的杜仲科杜仲属中的单种植物，具有降压、消炎、防癌抗癌等多种药用功效。杜仲全身是宝，经济价值极高[1]o近年来，杜仲研究、开发取得了突破性进展，更使其身价倍增。目前这一重要的药用植物在利用上一方面已出现野生资源匮乏、药材供应不足的问题，另一方面其产品开发与活性物

4、质提取的研究又较活跃，故寻找类似的替代资源受到关注［2］。自发现了能够产生紫杉醇的内生真菌以来，植物内生真菌能够产生与宿主相同或相似的生物活性成分已逐步得到验证［3,4］o本研究对杜仲内生真菌的种类进行分离及鉴定，以期了解杜仲内生真菌的资源情况，进一步研究其生物多样性。1材料与方法1•1材料分离所用材料为杜仲的根、茎、叶，釆自西北农林科技大学林学院校园内，树龄约20年，树体健壮，无病虫害。1.2培养基分离培养基为WA-抗生素培养基：琼脂20g,氨节青霉素200mg,链霉素200mg,水1000mLo纯化培养基为PDA培养基：马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂2

5、0g,水1000mL,pH值为7.0〜7.2o1.3试验方法1.3.1杜仲内生真菌的分离取杜仲多年生根、茎，刮去外表皮后，剥下根皮、枝皮用无菌水冲洗干净，用剪刀剪成1cmx1cm的小块。在经过紫外线消毒的接种间内，把剪好的材料置于75%乙醇消毒1min,而后用2.5%次氯酸钠消毒10min,再用75%乙醇消毒1min,无菌水冲洗2〜3次，剪去边缘，接入已倒好的WA-抗生素平板培养基上，将培养皿置于28C培养箱中倒置培养3〜7do叶片直接剪为0.5cmxO.5cm大小，做与根、茎相同的处理，并进行培养［5］。1.3.2杜仲内生真菌的纯化取切口处新长出的菌丝,及时

6、转接至新鲜PDA培养基上培养，待菌落出现后，根据菌落形态、颜色的差异以及长出时间的不同，分别挑取各平板上的菌落边缘的菌丝接于新的平板上进行分离培养。培养数日后，观察菌落的形态及其菌落边缘的整齐情况，并做相应的记录。采用菌丝顶端纯化法逐步纯化，对菌株编号后,转至PDA斜面培养基上，于28°C培养箱中培养5〜7d,然后放入4£冰箱保存［6,7］01.3.3杜仲内生真菌菌株鉴定从纯化培养数日的菌落上挑取菌丝并连同分生鞄子制成玻片，置于光学显微镜下观察菌丝形态、苞子梗形态、抱子形态以及抱子与营养体之间的着生关系，对照有关资料确定真菌的分类学地位［8,9］02结果与分析

7、2.1杜仲内生真菌的分离鉴定结果2.1.1菌株的分离鉴定从杜仲植物中分离获得80株内生真菌，经显微镜下形态观察，将80株内生真菌分类鉴定为6目、8科、14个属。其种群种类、数量、分布以及菌落特征和形态特征结果见表1、表2。从表1中可以看出，杜仲的内生真菌中，以链格抱属、镰抱霉属为优势种群，占总数的35%,其中链格抱属最多，占20%,其次是镰抱霉属，占15%。2.1.2植物内生真菌在杜仲不同部位中的分布从表2和表3中可以看岀，杜仲80株内生真菌分布各有特点，根部分布的内生真菌无论从数量和种属上都占优势，有33株，10个属；茎部26株，9个属；叶部21株，6个属。

8、其中链格抱属、镰鞄霉属、茎点菌属和腐霉