三尖杉、罗汉松和珙桐内生真菌鉴定及遗传多样性分析

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1、三尖杉、罗汉松和琪桐均属于热带或亚热带植物，三尖杉和罗汉松为裸子植物•琪桐属被子植物，均为国家保护植物•由于3种植物都有良好的药用价值。近年来被大量的砍伐-野生种质资源破坏严重。为了科学地保护这些种质资源•本文以三尖杉、罗汉松和琪桐根、茎、叶、果等不同组织中分离的274株内生真菌为实验材料•根据菌落的颜色、质地、生长速率和分生孑包子外观等形态学特征，对这些菌株进行了形态学鉴定。274株内生真菌中・75株内生真菌在人工培养基上不产孑包子•经菌落形态对出分析表明其中的22株疑似拟茎点霉属，经诱导实验成功产總2株-鉴定为拟茎点霉

2、属(Fhonvpg)。221株内生真菌鉴定为子囊菌亚门(Ascomycotina)和半知菌亚门(Deuteromycotina)2个亚门的4纲，5目，10属，其余53株不产胞内生真菌待鉴定。采用特异性PCR对所有菌株的核糖体转录间隔区(ITS,Internaltranscribedspacer)片段进行扩增，获得600bp左右的单带，以4种限制性内切酶(比几HuiI,⑷I,RI)对扩增的ITS片段进行限制性酶切片段长度多态性RFLP(Restrictionfragmentlengthpolymorphsim)分析，结果显示

3、出丰富的RFLP多态性，对三种植株的内生真菌酶切图进行聚类分析，三尖杉内生真菌RFLP有42个带型，罗汉松内生真菌为40个带型，琪桐内生真菌的酶切带型为36个。根据RFLP分析和形态学鉴定结果，从3种植物内生真菌中选取相似水平低、形态差异大的18株内生真菌进行了ITS碱基序列测定•最终确定274株内生真菌属于2个亚门，4纲，6目，笛属，一个待定菌株和无饱菌群。与形态学鉴定结果大体相符。这些研究结果表明三尖杉、罗汉松和琪桐内生真菌的属和种丰富，表现为热带真菌类型•优势属为刺盘抱属、曲霉属、小丛壳属；其中的小丛壳属是首次从三尖

4、杉科植物中分离。本文的研究结果提示三尖杉、罗汉松和琪桐内生真菌有丰富的遗传多样性，构成复杂的微生态系统，为后续研究奠定基础。矢键词：三尖杉；罗汉松；琪桐；内生真菌；遗传多样性；ITS；RFLPIdentificationandGeneticDiversityOfEndophytesIsolatesFromandDaacbhda^sBaHHHillAbstractCqirttDisfit诚RihjqiaandDa^ikiiidocteBaillaretropicalorsubtropicalplants.CqJzitPisf

5、n皿andRdxtcpsbelongtogymnosperms,andD^ikiiidoiteBailisangiosperms.Theyareallthenationalconservativeplantswithhighmedicinalvalue.Inrecentlyyears,toomanyplantswerebechopdown.Forprotectionofwildplants,274endophyteswereisolatedfromtheroots,stems,leavesofQ/ritw/yfit诚Rdx

6、tqisandIiukimiucteBaill.Basedonthecolonymorphology,growthrateonpotatodextroseagar(PDA)medium,theendophyticfungihadbeenidentifiedbymorphologicalcharacteristics.75endophyteswereinallofthe274endophytes.In妁曲她22endophyteswereclassifiedtoFhonvpsgenerabycolonymorphology,

7、andsuccessfullyinducedtoproductspores.221endophyteisolateswereclassifiedto10genera,5orders,4classes,2phylums.Theother53endophyticfunguswouldbeclassifiedwhichdidnotproductspores.Theinternalt「anscribedspacer(ITS)fragmentsofrRNAgeneofallisolateswereamplifiedbyPCRusin

8、gspecificprimers.Asingleproductabout600bpofITSwasobtainedforthegenomicDNAofeachfungus.ThepolymorphismsofITSfragmentswereexaminedbyrestrictionfragmentlen