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《人β淀粉样蛋白1-42在大肠杆菌中的表达纯化及鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、人B淀粉样蛋白「42在大肠杆菌中的表达纯化及鉴定摘要：目的在大肠杆菌中表达人源性B淀粉样蛋白1-42(APWestern-blotting鉴定。方法根据GenBank中的人源性AB1-42),纯化表达蛋白并进行分为三个片段人工合1-42编码序列，成,经退火延伸为全长dsDNA序列，酶切后连接至表达质粒pET-28a(+)构建为重组质粒pET-28a-AP+l-42,转化至人肠杆菌BL21株中，筛选高表达株，诱导表达，利用Ni株亲和纯化表达蛋白，SDS・PAGE后，转印PVDF膜后，进行Western-blotting鉴定。结果获得纯化的大肠杆菌表达蛋白A0表达形式为包涵体，经We
2、stern-blotting鉴定为人源性AB1-42蛋白。1・42,1-42蛋白，为下一步采用A131-42标记该蛋白作为诊断分子奠定结论本研究获得了纯化的AB了基础。关键词：人A31-42蛋白，阿尔茨海默病，蛋白表达与纯化，Western-blotting中图分类号:Q786文献标识码：A文章编号：Expressionofhumanpamyloid1-42proteininE.coliandit'spurificationandidentificationAbstract:ObjectiveToexpressthehumanpamyloid1-42proteininE.coli
3、,purifytheproteinandidentifyitbyWestern・blotting.MethodsThegenefragmentcodingthehumanpamyloid1-42regionwassynthesizedwith3fragmentsandannealed,thendigestedbyrestrictiveenzymeandlinkedintotheexpressionplasmidpET-28a(+)toconstructtheexpressionplasmidpET-28a-Apl-42.Afteridentifiedbyrestrictiveen
4、zymecutandDNAsequencing,theexpressionplasmidwastransformedintoE.coliBL21strain,thehighexpressionstrainwasselectedandinduced,theexpressedrecombinantproteinwaspurifiedbyusingNi+affinitychromatograph,andthepurifiedproteinwastransferredtoPVDFmembraneafterSDS-PAGE,thenidentifiedbyWestern-blotting・
5、ResultsTheexpressedrecombinantproteinwaspurified,itwasexpressedasineludebodyform,andtheexpressedproteinwasidentifiedtobehumanpamyloid1-42proteinbyWestern-blotting.ConclusionThehumanpamyloid1-42proteinwasexpressedandpurified,andthisworkprovidesabasisandmaterialsforApAlzheimer'sdisease.1-42prot
6、einmarkedandusedasmoleculardiagnosistoolforKeywords:humanpamyloid1-42,Alzheimer'sdisease,proteinexpressionandpurification,Westerblotting阿尔茨海默病(Alzheimerdisease,AD)是发生于老年和老年前期的中枢神经系统变性疾病，临床上表现为隐袭起病、进行性发展的记忆减退、认知、语言障碍及人格的改变等。其特征性的病理学改变是大脑皮层和皮层下结构细胞内神经元纤维缠纟吉(neuofibrillarytangle,NFT)、细胞外大量老年斑(se
7、nileplaque,SP)形成及神经元缺失[1,2]o它已成为继心脏病、癌症和中风之后人类的第四位死因。神经毒性3淀粉样蛋口(0-amyloid,A(3)在脑内的聚集和异常沉积是AD发病的关键环节。AD医学影像学诊断尚无突破性进展。为研制一种敏感且具有高血脑屏障的分子特异性探针腐胺■轧.B淀粉样蛋白(putrescine-Gadolinium-amylor-Bpeptide,PUT-GD-AB),该分子探针既可特异性标记AD的0淀粉样斑块(B-amyloidplaques),也
