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《钼矿周围土壤中微生物的分离与鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、钮矿周围土壤中微生物的分离与鉴定步骤一钳矿周围土壤的采集与处理一、采集地点：河南省、洛阳市、栾川县钳矿区土壤。二、实验器材：无菌牛皮纸袋，无菌铲，长线，标杆，标签，尺了，冰箱。三、样木采集及处理方法：1.取样：2012年3月于洛阳市栾川县钳矿区土地选择2个不同的地点进行采样,分别在4个方向选取3点，每个地点在不同位置各取3个样，直取5〜20cm深度的土壤，每点按lmxlm取样，每点取样量一致，将样点土壤混均后取200g装入无菌牛皮纸袋中封好，带冋实验室放入灭菌的袋中或放在4°C冰箱中暂存备用。采样注意事项：(1)样品标记：釆集的样品放入统
2、一的灭过菌的牛皮纸袋样中，用铅笔填写好标签，袋内外各具一张。(2)—个混合土样以取土1公斤左右为宜，如果样品数量太多，可用四分法将多余的土壤弃去(方法是将采集的土壤样品放在洁净的塑料布上，弄碎、混匀，铺成四方形，划对角线将土样分成四份，把对角的两份分別合并成一份,保留一份，弃去一份，果所的样品依然很多，可用四分法处理，直至所需数量为止)。(3)采样深度，对一般土地采样深度5—30cm即可，采样时深度要垂直，上下取土量要一致，每个采样点的取土深度及采样量应均匀一致，土壤上层与下层的比例要和同，取样器应垂直于地面入土，深度和同，用铁锹取样应先
3、铲出一个耕层断面，再平行于断面下铲取土。(4)采样量，1—2kg土量。(5)预处理及保存：将采集的样品平摊在聚乙烯塑料布上，在室温下阴干，土块捏碎，并拣除植物根、茎、叶及石块杂物，经20号筛筛分。(6)采用梅花形采样法，对于面积不大，地势平坦，土壤较均匀的口块，适合用这种方法，花形采样的布点以5-10个为宜。2.样品处理：将土样带回实验室进行处理，即将同一地点的3个土样各称取10g后混合均匀，称取混匀后的土样10g,放入盛有90mL无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，振摇约20min,使土样与水充分混合将微生物分散，此为10一
4、稀释；再用Im
5、L无菌吸管吸取ImL稀释后的土壤溶液注入盛有9mL无菌水的试管中，将吸管吹洗3次充分混匀，即成IO-?土壤稀释液；依次类推将土样依次稀释为IO3,IO4,W5,IO6的土样稀释梯度⑴习。步骤二培养基的制备—•实验用品小铝锅，天平，牛角匙,1000mL刻度搪瓷杯玻棒,pH试纸，分装漏斗,石棉网，橡皮圈,100mL和2000mL烧杯，标签纸，记号笔，可控温电炉，小刀,纱布，报纸,高压灭菌锅，电子分析天平。二，培养基的制备：根据不同微生物适宜生存条件的不同，分别选取适合不同菌种生长的培养基（见表1）o表1培养基种类及适用菌种培养基适合菌种牛肉膏
6、蛋口腺培养基细菌改良高氏一号培养基放线菌马铃薯培养基（PDA）或马丁氏培养基真菌（除霉菌外）察氏培养基霉菌1.牛肉膏蛋口陈培养基的制备（培养细菌人牛肉膏蛋白陈琼脂培养基配制牛肉膏3g蛋白月东10g氯化钠5g琼脂15~20g蒸懈水1000mLpH值7.0〜7.2灭菌1.05kg/cm2,121.3°C灭菌22min按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋口月东、NaCl放入烧杯屮用玻棒搅匀，在石棉网上加热使其溶解,待药品完全溶解后，将称好的琼脂放入已溶化的药品小，再加热溶化，在琼脂溶化的过程屮，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂，后补足所失
7、的水分，用精密pH试纸测原始dH值,如果pH偏酸，用滴管向培养基小逐滴加入1mol/LNaOH,边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7.6。反之，则用1mol/LHC1进行调节，注意pH值不要调过头,以避免回调。2.改良高氏一号合成培养基的制备（培养放线菌）:改良高氏一号合成培养基配制：可溶性淀粉20gKNO3lgK2HPO40.5gMgSO4-7H2O0.5gNaCl0.5gFeSO4-7H2OO.Olg（母液）琼脂20g水lOOOmLpH7.2〜7.4灭菌1.05kg/cm2,121.3°C,20min配制时，先用少量冷
8、水，将淀粉调成糊状，倒入少于所需水量的沸水中，在火上加热，边搅拌边依次逐一溶化其他成分，溶化后，补足水分到1000ml,调pH,1.05kg/cm2,121.3°C,灭菌20mino高温灭菌后,倒平皿前加入10%酚2滴至100ml培养基屮混匀，将培养基倒入平皿内约15ml/皿。1.马铃薯蔗糖琼脂培养基的制备（PDA培养基）或马丁氏培养基（培养真菌）：马铃薯培养基配制：马铃薯200g蔗糖（或葡萄糖）20g琼脂15〜20g水lOOOmLpH自然（约6.0）马铃薯去皮，切成块加水，煮沸30min（注意火力的控制，可适当补水）,用纱布（四层）过滤
9、，滤液再加糖及琼脂,，补足水至1000ml,灭菌1.05kg/cm2,121.3°C,20min。马丁氏培养基配制KH2PO4lgMgSO4-7H2O0.5g蛋白月东5g葡萄糖10g琼脂15—
