食品中烟酸和烟酰胺的测定 标准文本.doc

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1、GB5009.210—2011食品安全国家标准食品中烟酸和烟酰胺的测定（征求意见稿）201x-xx-xx实施201x-xx-xx发布中华人民共和国卫生部发布2010-06-01实施2010-××-××发布GB5009.89—xxxx前言本标准代替GB/T5009.89-2003《食品中烟酸的测定》、GB5413.15-2010《食品安全国家标准—婴幼儿食品和乳品种烟酸和烟酰胺的测定》、GB/T9695.25-2008《肉与肉制品维生素PP含量测定》。与GB/T5009.89-2003、GB5413.15-2010、GB/T9695.

2、25-2008相比，本标准修改如下：——修改了标准的名称；——调整了试剂顺序和格式；——修改并细化了适用于不同食品种类的前处理方法；——增加了96孔微孔板法（第一法）；——增加了适用的食品种类，增加了混合阳离子交换固相萃取柱富集果蔬天然食品样品（第二法）；——重新评估了检出限，增加了定量限。IGB5009.89—xxxx食品安全国家标准食品中烟酸和烟酰胺的测定1范围本标准规定了食品中烟酸和烟酰胺的测定方法。本标准第一法为微生物法，适用于各类食品包括以天然食品为基质的强化食品中烟酸和烟酰胺总量的测定；第二法为高效液相色谱法，适用于含量

3、较高或强化食品中烟酸和烟酰胺的测定。第一法微生物法2原理烟酸是植物乳杆菌Lactobacillμsplantarμm（ATCC8014）生长所必需的营养素，在一定控制条件下，将植物乳杆菌液接种至添加试样液的培养液中，培养一段时间后测定透光率，根据烟酸含量与透光率的标准曲线计算出试样中烟酸的含量。3试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。培养基可购买符合测试要求的商品化培养基。3.1试剂3.1.1盐酸（HCl）。3.1.2氢氧化钠（NaOH）。3.1.3氯化钠（NaCl）。3.1.4浓硫酸（

4、H2SO4）。3.1.5溴麝香草酚蓝（C27H28Br2O5S）：pH指示剂。3.1.6乙醇（C2H5OH）。3.2试剂配制3.2.1盐酸溶液（1mol/L）：用量筒量取吸取83mL盐酸，于1000mL烧杯中，加917mL水，混匀。3.2.2盐酸溶液（0.1mol/L）：吸取3.2.1盐酸溶液10mL，加水溶解至100mL。3.2.3氢氧化钠溶液（1mol/L）：称取40g氢氧化钠于1000mL烧杯中，加水溶解并稀释至1000mL，混匀。3.2.4氢氧化钠溶液（0.1mol/L）：吸取3.2.3氢氧化钠溶液10mL，加水溶解至100

5、mL。3.2.5生理盐水（0.9%）：称取9g氯化钠（NaCl），溶解于1000ml水中，分装10mL于试管中，121℃灭菌15min，备用。3.2.6乙醇溶液（25%）：量取200mL无水乙醇与800mL水混匀。12GB5009.89—xxxx1.1.1硫酸溶液（1mol/L）：于2000mL烧杯中先注入700mL水，用量筒量取56mL硫酸沿烧杯壁缓慢倒入水中，用水稀释到1000mL。1.2培养基1.2.1乳酸杆菌琼脂培养基：称取光解胨15g，葡萄糖10g，磷酸氢二钾2g，聚山梨糖单油酸酯1g，琼脂10g于1000mL烧杯中，加入

6、番茄汁100mL，加900mL蒸馏水溶解，混匀，调pH6.8±0.2（25℃），分装10mL于试管中，121℃高压灭菌15min，备用。1.2.2乳酸杆菌肉汤培养基：称取光解胨15g，葡萄糖10g，磷酸氢二钾2g，聚山梨糖单油酸酯1g，于1000mL烧杯中，加入番茄汁100mL，加900mL蒸馏水溶解，混匀，调pH6.8±0.2（25℃），分装10mL于试管中，121℃高压灭菌15min，备用。1.2.3烟酸测定用培养基：维生素测定用酪蛋白氨基酸12g，葡萄糖40g，乙酸钠20g，L-胱氨酸0.4g，DL-色氨酸0.2g，盐酸腺嘌呤

7、20mg，盐酸鸟嘌呤20mg，尿嘧啶20mg，盐酸硫胺素200mg，泛酸钙200mg，盐酸吡哆醇400mg，核黄素400mg，p-氨基苯甲酸100mg，生物素0.8mg，磷酸氢二钾1g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.4g，氯化钠20mg，硫酸亚铁20mg，硫酸锰20mg。加蒸馏水至1000mL，用0.1mol/L氢氧化钠溶液（3.2.4）调pH至6.7±0.2（20℃~25℃）。注：自行配制烟酸测定培养基时，所有试剂不得含有烟酸。1.3标准品1.3.1（C19H19N7O6）：纯度≥99.5%。1.4标准溶液的配制1.4.1烟酸标准储备

8、液（0.1mg/mL）：精确称取50.0mg烟酸标准品，用乙醇溶液（3.2.5）溶解并移至500mL容量瓶中，定容，混匀于2℃～4℃冷藏。此溶液每mL相当于100mg烟酸。1.4.2烟酸标准中间液（10mg/mL）：准确吸取10.0m