土壤中分解尿素的细菌的分离.ppt

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1、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数重点：从土壤中分离分级纤维素的微生物二：研究思路：（一）、筛选菌株１、Ｔaq细菌能忍受93OC左右的高温，是美国微生物学家托马斯.布鲁克于1966年在美国黄石国家公园的一个热泉中发现的，这说明寻找目的菌株时，要根据他虽生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。2、实验室中微生物筛选的原理：人为提供目的菌株的生长的条件（包括营养、温度、PH等），同时抑制或阻止其他微生物的生长。选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类微生物生长，同时抑制其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基作

2、用：主要应用于菌种分离[分析本课题使用的培养基]：KH2PO4Na2HPO4MgSO4.7H2O葡萄糖尿素琼脂碳源：葡萄糖;氮源：尿素；无机盐：KH2PO4Na2HPO4MgSO4.7H2O凝固剂：琼脂该培养基的选择作用主要是通过尿素来实现的。原因：在这个培养基中，尿素是唯一的氮源，只有能够利用尿素的细菌才能在这种培养基上正常生活。（二）、统计菌落数目：常用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目。原理：当样品的稀释度足够时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌。注：（1）为保证结果准确，一般

3、选择菌落数在30-300的平板进行计数。(2)为增强实验准确性，一定要涂布至少3个平板，作为重复组。（4）显微镜直接计数法（镜检计数）也是测定微生物数量的常用方法，另外也可采用滤膜法(三)设置对照1、目的：排除试验组中非测试因素对实验的结果的影响，提高实验结果的可信度。注：对照实验的分类；空白对照：不给对照组任何处理因素条件对照：给对照组部分对照因素，但不是所要研究的处理因素。自身对照：对照和实验都在同一研究对象上进行。相互对照：不单设对照组，而是几个试验组相互对照。分析：P23A同学出现不同试验结果的原

4、因：①土样不同；②培养基被污染或操作有误对照组设置：方案一：其他同学取与A同学相同的图样进行培养，若结果与A相同，则说明A无误;反之，则有误。方案二：将A同学配置的培养基在不加土样情况下进行培养，作为空白对照，以证明A的培养基是否受到污染.三、实验设计：（一）、土壤取样：注：①有机物含量高，土质肥，一般其中微生物含量高。②土壤中微生物大约70℅-90℅是细菌，而细菌适宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生活，因此，在距地表3-8cm的土壤层分布较多。③取土样用的小铁铲及装土样的信封要事先灭菌。（二）样品稀释：注

5、：分离不同的微生物要采用不同的稀释度。原因：土壤中各类微生物的数量是不同的，采用不同的稀释度以保证获得菌落数在30-300之间适于计数的平板（三）涂布平板（四）微生物的培养与观察注：①细菌一般在30-37OC的温度下培养1-2天，放线菌一般在25-28OC温度下培养5-7天，而霉菌一般在25-28OC温度下培养3-4天。每隔24小时统计一次数目，防止因培养时间不足而导致遗漏菌落数目一般来说，在一定条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征。鉴别分解尿素的微生物的方法：在以尿素作为唯一氮源的培养基中加入酚红指示

6、剂，培养一段时间，若PH上升，指示剂将变红，则该菌种可以分解尿素。