细胞骨架的观察.ppt

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1、实验6细胞骨架的观察【目的】掌握用光学显微镜观察植物细胞骨架的原理及方法，观察光学显微镜下细胞骨架的网状结构。【原理】植物细胞用适当浓度的TritonX-100处理后，可破坏细胞内蛋白质，但细胞骨架系统的蛋白质却保护完好。考马斯亮蓝R250(CoomassiebrilliantblueR250,考马斯亮蓝R250)是一种蛋白质染料，处理后的材料用考马斯亮蓝R250染色后，用光学显微镜观察，可以见到一种网状结构，即是细胞骨架结构。【材料】洋葱鳞叶。【实验用品】1．试剂：(1)2％考马斯亮蓝R250染色液：称考马斯亮蓝R250lg，溶于250mL无水乙醇中，加冰醋酸35mL

2、，再加蒸馏水至500mL。(2)磷酸缓冲液(pH6.8)：6.8mmol／L磷酸缓冲液，调至pH6.8。(3)M缓冲液(pH7.2)：50mmol／L咪唑、50mmol／L氯化钾、0.5mmol／L氯化镁、lmmol／L乙二醇双乙胺醚、0.1mmol／L乙二胺四乙酸、1mmol／L巯基乙醇，调至pH7.2。(4)1％TritanX-100：用M缓冲液配制。(5)3％戊二醛：用M缓冲液配制。(6)中性树胶。2．器具：显微镜，烧杯，玻璃滴管，载玻片，盖玻片，镊子。【实验步骤】1．用镊子撕取洋葱鳞叶内侧的表皮若干片(约lcm2大小若干片)，置于50mL烧杯中，加入pH6.8磷

3、酸缓冲液，使其下沉。2．吸去磷酸缓冲液，用1％TritonX-100处理20min。3．吸去TritonX-100，用M缓冲液洗3次，每次5min。4．用3％戊二醛固定30min。5．磷酸缓冲液(pH6.8)洗3次，每次5min。6．0.2％考马斯亮蓝R250染色10min。7．蒸馏水洗2次，然后将样品置于载玻片上，加盖玻片，于普通光学显微镜下观察。8．如果染色效果好，则可依次用50％乙醇、70％乙醇、95％乙醇、正丁醇、二甲苯处理样品，各5min。然后将样品平展于载玻片上，加1滴中生树胶，盖上盖玻片封片，制成永久切片。【实验报告】描绘所观察到的洋葱鳞叶细胞骨架图。