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时间：2020-02-02
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1、蛋白质含量的测定掌握蛋白质含量测定的原理和方法学会标准曲线的绘制熟练使用分光光度计实验目的测定蛋白质含量的方法测定蛋白质含量的方法较多基本上都是根据蛋白质的理化性质和生物学活性建立起来的。实验原理二、比色法：利用蛋白质与不同试剂的呈色反应，测定蛋白质的含量，如双缩尿法和酚试剂法（lowry’smethod）。三、紫外分光光度法：利用蛋白质对280nm紫外光有最大的吸光度而采用一、凯氏定氮法：根据蛋白质的含氮量来测定蛋白质的含量公式:每g样品中含氮克数×6.25×100蛋白质呈色试剂:酚试剂磷钼酸--钨酸的混和酸半胱氨酸、酪氨酸、色氨酸组氨酸还原型混和酸(兰色)蛋白质肽键碱性
2、烯醇化铜离子在pH10条件下螯合在肽键结构中从而使电子转移到混和酸的显色剂上，增强了酚试剂对蛋白质的敏感性。蛋白质与酚试剂呈色深浅与蛋白质的含量成正比，利用蛋白质的浓度与呈色的关系，制备标准曲线，来测定样品中的蛋白质含量。用已知浓度的标准牛血清白蛋白溶液（浓度为50mg%）配成一系列不同浓度的蛋白质溶液。取七支试管，编号，按下表操作实验操作编号1234567蛋白质含量（μg）标准液(ml)生理盐水ml)试剂A(ml)50100150200250空白0.10.20.30.40.5/0.5（样品）0.90.80.70.60.51.00.50.90.90.90.90.90.90.
3、9混匀，置50℃水浴十分钟，冷却至室温试剂B0.10.10.10.10.10.10.1室温放置十分钟试剂C(混匀)3.03.03.03.03.03.03.0冷却后在波长650nm条件下比色,测定其光密度值。以空白管调零.50℃水浴10分钟,标准曲线的绘制以蛋白质的含量（μg）为横坐标，光密度值（OD）为纵坐标，绘制出蛋白质含量的标准曲线。根据样品中的OD650,从蛋白质标准曲线中找到样品中蛋白质的μg数。计算每100ml血清中所含蛋白质的克数为：g%=样品中蛋白质含量（μg数）×1/0.5×100×10-6×500注意事项测定蛋白质的浓度最好在25~100μg之间，故血清稀
4、释倍数一般为200~500。各管加酚试剂应快，必须立即混匀，否则就会出现浑浊。2、绘制出标准曲线：要求规范作图铅笔作图、横、纵坐标名称及单位日期、作者、曲线名称曲线上体现出待测样品的OD值及ug数。3、计算：100ml血清中的蛋白质含量。要求：写出公式、代入数据、写出结果。1、原始数据:各管的OD值实验结果分析实验误差产生的原因总结该方法测定蛋白质含量的优缺点。实验讨论
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