植物的组织培养技术补习讲义.doc

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1、植物的组织培养技术一、植物组织培养技术原理1、原理：细胞的全能性；细胞分化（细胞的全能性概念：生物体细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能的特性。生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，都有发育成完整个体所必需的全部基因。全能性的比较：受精卵〉生殖细胞〉体细胞；细胞分化的概念：在植物的个体发育过程屮，细胞的形态、结构和生理功能上都会出现稳定性的差异，形成这些差异的过程叫做细胞分化。原因是特定基因在一定的时间、空间选择性表达的结果。意义：形成各种不同的细胞和组织，具有不同的生理功能。特点：持

2、久性；稳定性；全能性）2、必要条件：细胞离体；一定的营养物质、激索和其他外界条件（外植体：从活植物体上切下來进行培养的那部分细胞、组织或器官）3、植物组织培养的应用：培育无病毒植株；生产药物等有效代谢产物；人工种子；诱变育种二、菊花的组织培养重点和难点：植物组织培养过程小使用的无菌技术1、植物组织培养过程：离体的植物组织或细胞一一愈伤组织一一根芽分化一一柏•物体脱分化再分化移栽（细胞分裂索与生长索的比例脱分化1:1;芽分化生长索〈细胞分裂索；根分化生长索〉细胞分裂索）2、影响植物组织培养的因素:材料的

3、种类（一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也容易进行组织培养，入芦荟、海棠等）材料的年龄（菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝）保存时间的长短适宜的培养基（MS培养基主耍成分：人量元索N、P、K、Ca.Mg.S等；微量元索：B.MikCu、Zn、Fe、Mo、1、Co等；有机物：氨基酸、烟酸、维生索、蔗糖等）柏•物激索（生长索，细胞分裂索，赤霉索）Ph、温度、光照等（pH控制在5.8左右，温度控制在1旷22°C,每天用日光灯照射12h）使用顺序实验结果先使用生长索，后使用细胞分裂索有利于细

4、胞分裂，但不利于分化先使用细胞分裂索，厉使用生长索细胞即分裂也分化同时使用分化频率高思考：MS培养基中各种营养物质的作用分别是什么？与微生物培养基比较，MS培养基配方有哪些明显的不同?%1微量兀索和人量兀索提供植物细胞生活所必需的无机盐(在胡萝卜胚状体的分化屮，若培养基屮仅含硝酸盐则不能分化，只有钱盐同时存在时才会产生胚状体的分化；微量元索的用量极微,过量会引起植物细胞的酚系失活、代谢障碍和蛋白质变性以及纽•织死亡等毒害现彖)；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生索等物质上耍是为了满足

5、离体植物细胞在止常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。琼脂作为凝I古I剂，一般使用浓度0.6—1%。%1微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需捉供人量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元索和微量元索两大类。3、实验操作制备MS固体培养基外植体消毒接种••••••••••••••••••••••培养移栽＞栽培3.1制备MS培养基%1MS培养基母液的配置培养基各种成分浓度均扩人一定倍数，计算川量并称量，溶解配成浓缩液，即母液。类别成分规定童(mg)称取it(mg)

6、母液体枳(ml)配1升培养屜的吸JRJft(ml)大毎元索kno3NH4NO3MgSO4•7H2OKHTO4CaCb-2H^O■■190016503701704401900016500570017004400100010100微歆尤索M11S04•4HjOZnSO4•7H：OH3BO3KINa：MoO4•2H2OCuSO4-5H?OC0CI2•6H2O2230&66.20.830.250.0250.025223086062083252.52.5100010010铁盐Na2-EDTAFeSo4•7H2O

7、37.2527.8537252785100010010仃机物质II氮酸盐酸城腋索［酸毗哆素烟酸肌醇2.00.40.50.5100100202525500050010010②培养基使用液的配置取适量母液稀释,加入蔗糖和琼脂,定容并调节pH值至5.8-6.0o%1灭菌采用高压蒸汽灭菌法灭菌(121°C,20-30min)。3.2外植体消毒①取材%1消毒：流水冲洗一加少许洗衣粉刷洗一流水冲20min—放入70%酒精屮摇动23次，吸干水分—放入质量分数0.1%氯化汞溶液屮浸泡b2rnin,无菌水冲洗2、3次，

8、吸干水分%1接种%1培养：2周时间出现愈伤组织f约20天更换培养基进行继代培养f更换培养基诱导根芽分化%1移栽炼苗：先在外界环境闭瓶锻炼3天，再开瓶锻炼3天移栽：去掉培养基，可现在灭菌的珍珠岩或蛭石上培养使根系发达再转移到土壤屮3.3对照实验空白对照，组内对照令植物组培污染途径包括：外植体带菌；培养基及接种器具灭菌不彻底；接种操作时带入；环境不清洁思考：在整个操作过程中，是如何来实现无菌的？培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）；外植体的消毒（酒粘、氯化汞）；接种