医疗药品无菌检查法验证.ppt

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1、无菌检查法验证张荣玉一、概述：1.1定义：系用于检查药典要求的无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其它品种是否无菌的一种方法。2.1验证的必要性和意义：确认所采用的方法检查供试品无菌的适合性。保证检查结果的准确性、可靠性、准确性和重现性；检查方法的完整性。与同药品无菌检查接轨。通过对不同品种、批号的无菌检查比较；对产品生产全过程进行质量监控。二、存在问题:2.1专业人才少,缺乏相应的培训和管理。2.2工作量大,导致操作不规范。2.3检验方法缺陷，如直接种法可操作性差，引入污染的风险较大。2.4试验条件的影响环境影响培养基、稀释剂、冲洗液。所用品、器具

2、清洁灭菌。三、无菌检查的试验要求:3.1环境：10000级局部以下100级，布局符合无菌操作要求；或隔离系统（生物安全柜）。3.2人员：必须具备微生物专业知识，并经培训。3.3设备、器件、材料：经处理必须符合无菌要求，培养箱的温度指示装置要校验。3.4培养基：3.4.1按药典规定处方配制，采用经验证合格的灭菌程序灭菌。3.4.2保存：2-25℃避光保存；期限：非密闭容器3周，密闭容器1年。3.4.3培养基适用性、无菌性、灵敏度检查。3.4.4灵敏度检查：3.4.4.1检查用菌株传代不得超过5代。3.4.4.2常用菌株：金黄色葡萄球菌（CMCC(B)

3、26003)铜像假单胞菌[CMCC（B）10104]枯草芽胞杆菌[CMCC（B）63501]生孢梭菌[CMCC（B）64941]白色念珠菌[CMCC（F）98001]黑曲霉[CMCC（F）98003]3.4.4.3菌液配制、保存、接种培养按药典要求。3.4.4.4结果判断：空白对照应无细菌增长，加菌液的培养基管均生长良好，培养基灵敏度符合要求。3.5稀释液、冲洗液：3.5.1按药典规定配制后采用经验证的灭菌程序灭菌。3.5.2常用稀释液、冲洗液：0.1%蛋白胨水液PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液无菌0.1%氯化钠液中性磷酸盐缓冲液含0.1%聚山梨酯（

4、吐温-80℃）的0.1%蛋白胨水溶液3.5.3依据供试品的特性选择稀释液、冲洗液。四、无菌检查法验证:4.1原理:验证的所有环境、培养基、菌株、稀释液、冲洗液均与日常检查方法相一致、并符合相关规定。4.2验证分类：前验证：建立无菌检查方法时。再验证：修订检查方法时。定期验证：供试品组合或原检查条件改变。4.3验证方案制定原则：供试品的抑菌性，敏感菌种选择;适当的方法消除或降低抑菌性。样品的预处理方式能有效抵消（或中和）产品的抑菌性。样品的预处理方式、检验过程、培养条件均不影响样品中微生物的生长。验证记录真实完整地记录所做试验。4.4验证重点环节分布

5、：样品需前处理不需前处理验证前处理方法对污染菌生长，检出影响有抑菌作用去除抑菌作用通过验证实验判无抑菌作用验证抑菌活性去除方法的有效性及对污染菌检出物影响检验4.5验证方法：4.5.1制备验证试验菌液，按药典方法配制菌液。4.5.2选择配制适合的培养基、稀释液、冲洗液。4.5.3供试品的处理：验证所用的溶解剂、稀释剂、助溶剂、破乳剂等的有效性，使用量及微生物生长无影响。验证加热温度、离心速度和时间对微生物生长或分布无影响。不需前处理的供试品免做。4.5.4无抑菌性样品的验证方法：依据产品溶解性和微生物限度选择合适的中性稀释剂溶解和稀释，用直接接种法

6、验证，常用中性稀释液或淋洗液。4.5.5具有抑菌性样品的验证方法：确定抑菌作用（抑细菌、真菌试验验证），选择敏感菌株对供试品抑菌活性去除效果检验（阳性菌回收试验）。消除样品抑菌性的方法验证：化学钝化中和法（化学试剂中合法）：利用化学（生物）专属性灭活，常用钝化剂有：对氨基苯甲酸、卵磷脂、聚山梨酯-80等。薄膜过滤法和直接接种法也可用。对化学中和剂不敏感的样品，用酶中和，如β-内转氨酶。稀释中和法：利用降低供试品的相对浓度，将样品稀释至最低抑菌浓度下进行。薄膜过滤法：利用体积差异分离，通过薄膜过滤，微生物被截于滤膜，培养薄膜观察有无微生物生长。各方法

7、组合运用，效果更好。③验证方法:a.验证分组：A组:样品组,适当方法中和样品,加入少量验证微生物(接种量少于100cfu)。B组:对照组,0.1%蛋白胨或PH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液,加少量微生物(接种量少于100cfu).C组：阳性对照组，不经中和处理，将实验菌株直接接种于培养基中(接种量少于100cfu)。b.结果分析:A组与B组微生物生长数量相似，表明中和剂的中和方式有效消除了样品的抑菌性，如果B组与C组的微生物数量相似，表明样品预处理用中和剂的毒性、检测程序和培养条件等均不影响微生物生长。样品如无抑菌性，省去B组试验，A组与C组直接比较

8、。A组微生物生长数量不及C组微生物生长数量，表明试验用器具材料或培养条件等方面存在对微生物生长不利因素。c.为考查验证方法