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1、蛙血清小分子肽的分离鉴定及生物活性检测［摘要］目的分离和鉴定蛙血清去蛋白提取物屮的小分子肽，检测其生物活性。方法用超滤法收集蛙血清中相对分子质量为1000—3000的组分；JURP-HPLC对超滤组分进行分离纯化；用串联质谱法分析鉴定小分子肽的分子质量；用呼吸检压仪测定并计算肝细胞呼吸活性和刺激指数。结果将相对分子质量为1638的小分子肽的二级质谱数据经处理后在数据库搜索，没冇搜索到相关肽的信息，可能是新发现的肽。呼吸活性检测显示小分子肽有很强的呼吸活性，氧系数(Q02)24・0uL02/(mg?h),刺激指数(S
2、I)22.5,强于小牛血清去蛋白注射液。结论蛙血清小分子肽是一种新发现的肽，相对分子质量为1638,其笏效可能优于小牛血清去蛋白注射液。［关键词］蛙血清；小分子肽；呼吸活性［中图分类号］R96［文献标识码］A［文章编号］1673-7210(2016)05(a)-0016-05［Abstract］ObjectiveToisolatedandidentificatedofsmallmolecularpeptidefromthedeproteinizedfrogserumextract,inordertodetectit
3、sbiologicalactivity.MethodsCol1ectingthecomponentswithrelativemolecularweightof1000-3000infrogserumwasusedultrafiltration；separatingandpurificatingtheultrafiltrationcomponentswasusedRP-HPLC；themolecularweightofsmal1molecularpeptideswasanalyzedandidentifiedbyta
4、ndemmassspectrometry；therespiratoryactivityandstimulationindexoflivercellsweremeasuredandcalculatedbyrespiratorypressuredetector.ResuItsThesecondstagemassspectrometrydataofsmal1molecularpeptidewithrelativemolecularweightof1638wasdisposed,andthenitwassearchedin
5、thedatabase,therewasnorelevantpeptideinformation,maybeitwasanewdiscoveryofthepeptide・Detectionofrespiratoryactivityshowedsmallmolecularpeptideshadverystrongrespiratoryactivity,oxygenquotient(Q02)24.0uL02/(mg?h),andstimulationindex(SI)22.5,itwasstrongerthaninca
6、lfserumtoproteininjection.ConclusionThefrogserumsmallmolecularpeptideisanewlydiscoveredpeptide,therelativemolecularweightis1638,theefficacyofthedrugisbetterthanthatofcalfserumalbumininjection.[Keywords]Frogserum；Smallmolecularpeptide；Respiratoryactivity研究表明，动物
7、血清的主要药理活性成分是小分子肽[1]。笔者的前期研究发现蛙血清去蛋白提取物能提高心、脑组织对缺氧的耐受力[2],能保护心、脑缺血再灌注损伤[3-4],说明其含有对心脑缺血缺氧性损伤有保护作用的小分子肽类物质。因此，本研究从蛙血清去蛋白提取物中分离并纯化其中的小分子肽，鉴定小分子肽的分子质量，以期确定其分子结构和名称，并通过测定和计算小分子肽的呼吸活性和刺激指数（SI）,探讨该小分子肽的药效。1材料与方法1.1实验动物SPF级雄性豚鼠1只，体重250-350g,由广东医学院实验动物中心提供[合格证号:SYXK（粤）
8、2013-0007]o1.2药品试剂色谱纯乙腊（北京汇海科仪科技有限公司）；三氟乙酸（TFA,Sigma公司）；10%氢氧化钠溶液（分析纯，广州化学试剂厂）；Soerensen缓冲液（0.0667mol/L）：称取磷酸氢二钠（Na2HP04?2H20,分析纯,广州化学试剂厂）9.72g和磷酸二氢钾（KH2P04,分析纯，广州化学试剂厂）1.65g加双蒸水至1
