固相萃取-高效液相色谱串联质谱法同时测定土壤中3种微囊藻毒素.pdf

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1、第4l卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第1期2013年1月ChineseJournalofAnalyticalChemistry88～92DOI·10．3724／SP．J．1096．2013．20506固相萃取一高效液相色谱串联质谱法同时测定土壤中3种微囊藻毒素李彦文黄献培2吴小莲向垒詹晓静李梓君温宏飞钟方龙莫测辉2洪爱华(暨南大学环境工程系，广州510630)(广东省高校水土环境毒害性污染物防治与生物修复重点实验室，广州510630)(暨南大学分析测试中心，广州510630)摘要建立了测定土壤中典型微囊藻毒素(MC—LR，MC—RR和MC—YR)的固相萃取一高效液相

2、色谱串联质谱(LC／MS)分析方法。土样采用0-olmol／LEDTA—Na4PO，溶液涡旋提取，提取液经Sep—PakC固相萃取柱富集净化，在电喷雾正离子模式下，以多反应监测模式采集数据进行定性与定量分析。结果表明：土壤中MC—LR，MC—RR和MC—YR的检出限量分别为0．25，0．25和0．50p．g／kg，回收率分别为72．6％～97．4％，54．9％～62．8％和69．0％～90．7％；相对标准偏差为4．3％～16．9％。应用此方法检测云南滇池周边部分农田土壤中样品，检出微囊藻毒素，含量范围为1A3～2129gg／kg。关键词固相萃取；高效液相色谱串联质谱；土壤；微囊藻

3、毒素1引言微囊藻毒素(Microcystins，MCs)是由水体中蓝绿藻如铜绿微囊藻(Microcystisaeruginosa)、鱼腥藻(Anabaenaspp．)等产生的具有生物活性的单环七肽化合物(分子结构如图1所示)。环肽结构中含有R和R，两个可变的氨基酸基团，R和的不同氨基酸组合形成多种MCs异构体。其中MC．LR，MC。RR和MC—YR(L，R，Y分别代表亮氨酸、精氨酸、色氨酸)是分布最广和毒性最大的3种微囊藻毒素，其中MC—LR的生理毒性是目前已知毒性仅次于二嗯英的剧毒化合物，是公认的肝毒素和促癌剂。鉴于此，世界卫生组织设定微囊藻毒素临时可耐受的每日摄取量为0．04

4、gg／(kg·d)J。随着蓝藻水华产生造成地表水体污染日益严重，微囊藻毒素在世界各地水体中普遍检出，其在水环境中的污染特征、环境行为以及对水生生态系统和人体健康危害”，一直备受关注。在实际环境中，受微囊藻毒素污染的水体通过灌溉或溢流等途径进入农田土壤，特别是一些地方在治理蓝藻水华时将其打捞出来作为有机肥施入农田口，藻细胞破裂释放高浓度微囊藻毒素会严重污染土壤，危害农作物生长和农产品安全，进而通过食物链对人体健康产生危害H】。与水体环境相比，由于缺乏简便有效、高灵敏度的分析方法检测土壤中的含量，微囊藻毒素在土壤环境中的研究工作相对滞后，对于土壤特别是农田土壤中微囊藻毒素的污染状况及

5、危害还鲜见报道。目前对于土壤中微囊藻毒素的分析方法主要有MMPB(2一甲基一3．甲氧基4．苯基丁酸)法[1。该方法将MCs氧化生成MMPB，甲酯衍生化后用GC—MS测定MCs的总含量，方法步骤多，条件要求严苛，不能对各种微囊藻毒素异构体进行定性和定量测定；采用固相萃取一液相色谱配紫外检测器可测定水体、土壤、沉积物中微囊藻毒素，检出限量在mg／kg级，不能满足环境土壤q~gg／kg级低含量微囊藻毒素残留测定要求；另外，由于土壤基质相对复杂，采用保留时间进行定性分析时抗干扰差。因此，建立准确、灵敏的土壤中痕量微囊藻毒素的分析方法是开展微囊藻毒素在土壤环境中归宿及毒理学研究的基础。本研

6、究通过优化前处理及检测条件，建立了同步提取、同时测定土壤中3种典型常见微囊藻毒素MC。LR，MC—RR和MC．YR的LC—MS／MS分析方法。采用EDTA—Na4P2O7溶液进行提取，Sep．PakC】82012-05．14收稿；2012-08-22接受本文系广东省自然科学基金(No．2011020003196)、暨南大学科研培育与创新基金(No216113133)和暨南大学大学生创业训练计划(No．CX12043)资助E—mail：tchmo@j．u．edu．cn第1期89柱或HLB柱净化富集，质谱正离子多反应监测模式进行定量分析，检出限量为0．25～O．50gg／kg，低于目

7、前文献报道的检出限量，操作相对简便，准确度和灵敏度较高，能够满足实际环境土壤样品的污染分析，为开展土壤中微囊藻毒素污染研究提供技术支持。2实验部分2．1仪器与试剂ABI4000Q—TRAP三重四极杆质谱仪(美国AB公司)；配电喷雾离子源(ESI)；l100液相色谱系统(美国Agilent公司)；Mill—QA10超纯水系统(美国Millipore公司)；Sep—pakC18固相萃取柱(6mL，500mg，Waters公司)；使用前依次用3mL甲醇和10mL水进行活化。微囊藻毒素标