实验九微生物的生理生化反应.ppt

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1、实验九微生物的生理生化反应一、实验目的通过不同细菌（以细菌为代表来说明微生物）对不同含碳、氮化合物分解利用的情况不同来了解不同细菌碳、氮代谢类型的多样性。二、实验原理不同微生物对同种碳、氮化合物利用情况不同，而同一微生物对不同碳、氮化合物分解利用情况也不相同，反映出微生物具有不同酶系导致代谢类型的差异（酶系包括胞外酶系及胞内酶系）。因此，不同的微生物具有不同的酶系，利用不同物质作为底物进行反应后，产生不同的产物，在添加适当指示剂的条件下会显示不同的结果，所以可以利用微生物的不同生理生化反应来作为对微生物分类和鉴定的重要依据。糖发酵实验细菌在分解糖或醇(如葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、甘油)的能

2、力有很大的差异。有些细菌发酵某种糖后产生各种有机酸(如乳酸、醋酸、甲酸、琥珀酸)及各种气体(如氢、甲烷、二氧化碳)。有的细菌只产酸不产气。酸的产生可利用指示剂来指示。在配制培养基时可预先加入溴甲酚紫(pH5(黄)－pH7(紫))。当细菌发酵糖产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。气体的产生可由糖发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。糖发酵试验IMViC反应：吲哚实验：甲基红实验V.P.实验柠檬酸盐实验H2S实验吲哚试验:检查吲哚的产生有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚。甲基红试验：检查微生物利用葡萄糖产酸的情况细菌代谢

3、糖产生的有机酸会使培养基变酸，可通过加入的甲基红指示剂（PH6.3橘黄色-PH4.2红色）。尽管所用的肠道菌都能发酵葡萄糖产生有机酸，大肠杆菌和产气杆菌在培养早期均产生有机酸，但大肠杆菌在培养后期仍能维持酸性PH4.0，而产气杆菌则转化有机酸为非酸性末端产物，如乙醇，丙酮酸等。甲基红试验阳性阴性对照伏-普试验：测定细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的情况。某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物，如丙酮酸。丙酮酸进行缩合、脱羧生成乙酰甲基甲醇，此化合物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成二乙酰。二乙酰与蛋白胨中的精氨酸的胍基作用生成红色的化合物，即V.P.反应阳性。VP试验阴性阳性大肠杆

4、菌：—产气杆菌：+柠檬酸盐试验：检测柠檬酸盐是否被利用有些细菌能够利用柠檬酸盐作为碳源，分解柠檬酸盐及培养基中的磷酸铵后，产生碱性化合物，使培养基PH升高，当加入1%的溴麝香草酚兰指示剂(PH小于6.0呈黄色，6.0-7.0绿色，大于7.6蓝色）时，培养基就会由绿色变为深蓝色。硫化氢试验：检测硫化氢的产生有些细菌能分解含硫的有机物，如胱氨酸、半胱氨酸和甲硫氨酸等产生硫化氢，硫化氢一遇到培养基中的铅盐或铁盐等，就形成黑色的硫化铅或硫化铁沉淀物。动力观察：MOTILITYTEST1.Pseudomonasaeruginosa（铜绿假单胞菌）：Motile2.Staphylococcusaur

5、eus：Non-motile3.Bacillussubtilis：MotilePrincipleTheloweragarconcentrationinthemediumallowslimitedmovementofmotilebacteriafromtheareaofthestab.Motilitywillbedetectableasdiffusegrowthradiatingfromthestabline.Aspecialdye,atetrazoliumsalt(TTC)maybeaddedtomaketheradiatinggrowthmorevisibleasthereddishdi

6、ffusearea.三、实验器材1.菌种：大肠杆菌、产气杆菌、变形杆菌2.培养基：见表格四、实验内容试验菌名IMViC糖发酵试验H2S试验吲哚试验甲基红(M.R)试验伏普（VP）试验柠檬酸盐试验大肠杆菌√√√√√产气杆菌√√√√√变形杆菌√培养基蛋白胨水培养基葡萄糖蛋白胨水培养基柠檬酸盐斜面乳糖发酵醋酸铅培养基接种方式液体液体斜面液体穿刺1.将大肠杆菌、产气杆菌、变形杆菌在对应培养基内接种液体√√葡萄糖发酵√2.培养37℃24-48h3.结果观察：①吲哚试验：1ml乙醚萃取，剧烈摇晃静置分层，沿壁缓加吲哚试剂，观察玫瑰环。②M.R试验：加入2滴甲基红试剂，阳性为红色。③VP试验:加40％KO

7、H约10滴，再加等量5％α－奈酚,酒精灯加热，阳性红色。④柠檬酸盐试验：直接观察，阳性蓝色。⑤糖发酵试验：直接观察，产酸黄色;产气，杜氏小管中有气泡。⑥H2S试验：直接观察，阳性有黑色沉淀。实验名称培养基菌种现象糖发酵实验葡萄糖发酵葡萄糖发酵培养基大肠、产气颜色变化、有气泡积聚乳糖发酵乳糖发酵培养基大肠、产气IMViC反应吲哚实验蛋白胨水培养基大肠、产气产生红色玫瑰吲哚甲基红实验葡萄糖蛋白胨水培养基大肠、产气