橡胶树热研8-79原生质体培养再生植株.pdf

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1、南方农业学报JOURNALOFSOUTHERNAGRICULTURE2013，44(12)：2040—2045ISSN2095—1191；CODENNNXAABhttp：／／www．nfny)【b．enDOI：10．39696：issn．2095—1191．2013．12．2040橡胶树热研8—79原生质体培养再生植株戴雪梅，李哲，华玉伟，黄天带，孙爱花，周权男，黄华孙+(中国热带农业科学院橡胶研究所／农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室悃家橡胶树育种中心，海南儋州571737)摘要：【目的】优化橡胶树热研8．79原生质体分离和培养条件，建立橡胶树

2、原生质体培养植株高效再生体系，为橡胶树体细胞杂交育种奠定基础。【方法】以橡胶树热研8．79花药愈伤组织建立的胚性细胞悬浮系为试验材料，设计不同酶组合、酶解时间和悬浮细胞继代时间进行原生质体分离，采用不同培养基、看护细胞浓度和接种密度进行原生质体培养，对原生质体分裂发育的小愈伤组织进行体细胞胚诱导及植株再生培养，统计原生质体的产量、分裂频率、体胚数及体胚萌发率。【结果】酶组合为纤维素酶1．50％+果胶酶0．15％+离析酶0．50％、酶解时间为12hH寸，继代培养第5d的胚性悬浮细胞达最高产量(3．6x107个／mLPCV)；用酶解细胞和看护细胞继代培养基分

3、别作为原生质体液体培养基和看护培养基，比使用KPR培养基更有利于原生质体的分裂，当看护细胞浓度为5％、接种密度为5x105个／mL时原生质体的分裂频率最高，达54％。原生质体持续分裂形成肉眼可见的小愈伤组织增殖后经体胚发生途径发育成完整的小植株。【结论】通过优化橡胶树热研8．79胚性悬浮细胞原生质体分离的酶组合、酶解时间、继代培养时间及看护培养过程中培养基组成、看护细胞浓度和接种密度等影响因素，可以建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系。关键词：橡胶树；热研8—79；胚性悬浮细胞；原生质体；看护培养；植株再生中图分类号：$794．1文献标志码：A文章编号

4、：2095—1191(2013)12—2040—06PlantregenerationfromprotoplastcultureofReyan8-79(HeveabrasiliensisMiill．Arg．)DAIXue—mei，LIZhe，HUAYu—wei，HUANGTian—dai，SUNAi-hua，ZHOUQuan—nan．HUANGHua—sun4(RubberResearchInstitute，ChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences／KeyLaboratoryforBiologyandGen

5、eticResourcesUtilizationofRubberTree，MinistryofA—culture／StateRubberTreeBreedingCenter，Danzhou，Hainan571737，China)Abstract：【Objective】TheeffeetfactorsonprotoplastisolatiouandcultureofReyan8-79wereoptimizedtoestablishanefficientprotocolforplantregenerationfromprotoplastculture．whi

6、chwasthepremiseforsomatichybridizationinrub—ber．【Method】TheembryogeniccellsuspensionderivedfromanthercalliofReyan8-79wasusedasexperimentalmateri—als．Differentenzymecompositions．exposuretimeandtimeaftersubcultureofsuspensioncellweredesignedforprotoplastisolation，anddifferentmedium

7、compositions，concentrationofnursecellsandplantingdensitywereusedforprotoplastculture．7l'hemicrocalliformedfromprotoplastswereinducedforsomaticembryogenesisandsubsequentlyplantregenera-tion．Protoplastyieldanditsdivisionfrequency．numberofsomaticembryoandgerminationratewerecounted．【

8、Result】Theresultsshowedthehighestyieldof