贝类精子质量检测与评价方法的研究Ⅴ栉江珧精子线粒体活性的荧光检测.pdf

《贝类精子质量检测与评价方法的研究Ⅴ栉江珧精子线粒体活性的荧光检测.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第31卷第6期广东海洋大学学报V01．31No．62011年12月JournalofGuangdongOceanUniversityDec．2011贝类精子质量检测与评价方法的研究V：栉江珧精子线粒体活性的荧光检测郑娇，王梅芳，余祥勇(广东海洋大学水产学院，广东湛江524025)摘要：采用罗丹明123(Rhl23)和碘化丙啶(PI)两种荧光染料对栉江珧(Atrinapectinata)精子线粒体活性进行检测，比较不同染液浓度和染色时间的检测效果，并用该方法检测和比较超低温冷冻保存对线粒体活性的影响

2、。结果显示：Rhl23和PI染色的最适染液浓度均为10Ixg／mL，染色时间控制在10min之内；染色后具有线粒体活性的精子发出绿色荧光，死精子发出红色荧光，质膜受损但线粒体还未受损的精子发出红绿色荧光，表明Rhl23和PI双荧光染色检测栉江珧精子线粒体活性是可行的；精液经冷冻后，线粒体活性为61．9％、质膜完整率56．8％，显著低于新鲜精液组(95．3％、93．5％)，表明冷冻对精子结构会造成不同程度的损伤，Rhl23和PI双荧光染色法可用来检测栉江珧精子质量。关键词：栉江珧；精子；线粒体；罗丹

3、明123(Rhl23)；碘化丙啶(PI)；荧光染色中图分类号：Q959．215；Q954．43文献标志码：A文章编号：1673—9159(2011)06—0086—05StudyofQualityDetectionandEvaluationonSpermofMolluscV：DetectionofSpermMitoehondrialActivityofAtrinapectinatabyUsingFluorescentDyeZHENG-Jiao，WANGMei-fang，YUXiang—yong(F

4、isheriesCollege，GuangdongOceanUniversity，Zhanjiang524025，China)Abstract：Twofluorescentdyes，Rhodaminel23(Rhl23)andPropidiumiodide(PI)，wereusedtodetectthemitochondrialactivityofthespermatozoaofAtrinapectinata，andthetestingeffectofdifferentstainingtimean

5、ddyeconcentrationwerealsocompared，andthemitochonddalactivityofspermaftercryopreservation(frozeninliquidnitrogenfor24h1wasdetected．Theresultshowedthatthemosteffe：ctivestainingappearedwhentheconcentrationofRhodaminel23andPropidiumiodidewerel0I，tg／mL，and

6、theoptimumreactiontimewas10min．Theactivityofmitochondfiaspermemittedgreenfluorescence,anddeadspermemittedredfluorescence．andspermwithdamagedplasmalemmaandundamagedmitochondriasentoutred—greenfluorescence．Therefore．Rhl23-PIdoublestainingwasfeasible．Fro

7、zensperm’Smitochondrialactivityandplasmamembraneintegrity’was61．8％，56．8％，respectively,andwaslowerthanfreshsperm(95．3％，93．5％)．Theresultindicatedthatthefreezing··thawingprocessdamagedspermstructureandRh123-·PIdoublestainingcoulddetectthequalityofthesper

8、matozoaofAtrinapectinata．·、Keywords：Atrinapectinata；spermatozoa；mitochondria；Rhodaminel23；Propidiumiodide；fluorescentstaining收稿日期：2011-10—11基金项目：公益性行业(农业)科研专项(200903028)；广东省科技计划项目(20108031300011)第一作者：郑娇(1986一)，女，硕士研究生，海产经济动物发育生物学。通讯作者：余祥勇(1966