水稻转基因组织培养步骤的具体事宜.doc

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1、农杆菌介导的转化一．试剂16-BA(6-BenzylaminoPurine)SigmaCatNo.B-58982KT(Kinetin)SigmaCatNo.K-07533NAA(Napthaleneaceticacid)SigmaCatN-06404IAA(Indole-3-aceticacid)SigmaCatNo.I-514852,4-D(2,4-Dichlorophenoxyaceticacid)SigmaCatNo.D-84076KanamycinUSBCatNo.179247CH(CaseinEnzymaticHydroly

2、sate)SigmaCatNo.C-72908Hn(hygromycinB)GiBcoBRLCatNo.10687-0109Cn(Carbenicillin)国产分装10NicotinicacidSigmaCatNo.N-076511PyridoxineHClSigmaCatNo.P-866612ThiamineHClSigmaCatNo.T-390213InositolSigmaCatNo.I-301114PhytagelSigmaCatNo.P-816915DimethylSulfoxide-DMSOSigmaCatNo.D-58

3、7916X-gluc(5-bromo-4-chloro-3-indolyl-D-galactoside)SigmaCatNo.B-378317AS(Acetosringone)Aldrichchem.,CO01531EG二．溶液1.MSmaxNH4NO316.5gKNO319.0gKH2PO41.7gMgSO4∙7H2O3.7gCaCl2∙2H2O4.4g或CaCl23.32g逐一溶解药品后，加dH2O定容到1000ml。2.MSmin母液(100×)KI0.083gH3BO30.62gMnSO4∙4H2O2.23g或MnSO4∙H2

4、O1.69gZnSO4∙7H2O0.86gNa2MoO4∙2H2O0.025gCuSO4∙5H2O0.0025gCoCl2∙6H2O0.0025g注意：Na2MoO4必须单独溶解后再与其它组分混合。加dH2O定容到1000ml室温保存。3.N6max母液(10×)KNO328.3gKH2PO44.0g(NH4)2SO44.63gMgSO4∙7H2O1.85gCaCl2∙2H2O1.66g或CaCl21.25g逐一溶解药品后，加dH2O定容到1000ml。1.N6min母液(100×)KI0.08gH3BO30.16gMnSO4∙4H2

5、O0.44g或MnSO4∙H2O0.3335gZnSO4∙7H2O0.15g加dH2O定容到1000ml室温保存。2.Fe2+-EDTA(100×)取一个烧杯加300mldH2O以及FeSO4∙7H2O2.78g；在另一个烧杯中也加300mldH2O加热到70℃后加入Na2EDTA∙2H2O3.73g；待到两种药品都溶解了，混合，70℃保温2hr，然后加dH2O定容到1L，4℃保存。3.维生素(100×)Nicotinicacid0.1gPyridoxineHCl(VB6)0.1gThiamineHCl(VB1)0.1gGlycine

6、0.2gInositol10g加dH2O定容到1000ml4℃保存。4.AAmax母液(10×)KCl29.50gNaH2PO41.50g或NaH2PO4∙2H2O1.95gMgSO4·7H2O2.50gCaCl2∙2H2O1.50g或CaCl21.13g加dH2O定容到1000ml室温保存。5.AAmin母液(1000×)MnSO4∙H2O1.0gH3BO30.3gZnSO4∙7H2O0.2gKI0.075gNaMoO4∙2H2O0.025gCuSO4∙5H2O0.0025gCoCl2∙6H2O0.0025gNa2MoO4必须单独溶

7、解后再与其它组分混合，加dH2O定容到1000ml室温保存。1.2,4-D母液(1mg/ml)2,4-D100mg先加1.0ml1NKOH摇5min，然后加10mlH2O继续摇直到2,4-D溶解，加水定容到100ml室温保存。2.6-BA母液(1mg/ml)6-BA100mg加1.0ml1NKOH摇直到6-BA溶解，加水定容到100ml室温保存。3.NAA母液(1mg/ml)NAA100mg加1.0ml1NKOH并搅动直到NAA溶解，加水定容到100ml室温保存。4.IAA母液(1mg/ml)IAA100mg加1.0ml1NKOH摇直

8、到IAA溶解，加水定容到100ml室温保存。5.100mMAS母液(1mg/ml)AS0.196gDMSO10ml分装到1.5ml离心管4℃保存。6.1NKOH母液(1mg/ml)KOH5.6g用100mlH2O溶解后室