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1、药用植物黄苓组织培养技术药学系屮草费栽培与鉴定2008级柴龙1085090221材料与方法1.1培养材料选取健壮，无病害的黄苓幼苗带节颈段，幼苗长有6—7个节段为宜，去掉两侧叶片,作为外植体。黄苓种苗有甘肃中医学院组织培养室提供。1.2培养条件培养温度25°C左右,光照1500-20001X,每日光照12h。1.3培养方法外植体消毒，先去掉其带节颈段，去掉两侧叶片，剪成3-4cm的节段，在H来水下冲洗lh,然后拿到无菌室先用75%的酒精对其消毒3min,用无菌水冲洗4-5次。将火菌后的外植体首先用无菌滤纸吸干，然后放到放到无菌培养1UL
2、屮切成lcin的小颈段，接种于诱导培养基屮。每种接一个外植体。1.4养基MS+3.0%蔗糖+0.75%琼脂，附加不同浓度的BA和NAA,PH为6.0。增殖培养在上述培养基基础上附加不同浓度的BA和NAAo无根苗生根培养基为1/2MS培养基，附加不同浓度的BA和NAAo2实验步骤2.1培养材料的诱导外植体接种后20天左右，叶腋内开始萌动生长，并形成愈伤组织，呈现质地疏松,晶亮带点绿色的状况，培养基为MS+3.0%蔗糖+0.75%琼脂+0.5mg/lBA+0.2mg/LNAA,PH为6.0o2.2愈伤组织的诱导愈伤组织长到一个月左右，表面开
3、始岀现许多绿色的亮点。随后亮点逐渐长大，接种到MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.2mg/L的培养基屮，过20天的继代培养。一个带节颈段的幼苗可产生20个芽左右。2.3生根培养苗高长高达4・6cm从愈伤组织的茎部切断，转移到l/2MS+NAA0.2mg/L生根培养基屮，经过二十夭左右岀现根。3移栽3」出瓶后的管理移栽前把生根苗直接从瓶屮取岀，去秒是动作要轻，防止根苗受伤，取出后用清水冲洗除去根部的培养基。在高为4cm冇苗版屮装入沙十蛭石=2:1。栽培温度为25°C左右，湿度80-90%o如无温室可搭建30-50Cm的小拱棚，遮阴与保
4、温，确保组培苗的成活率。4MS培养基的配制这样每次使用时，取其总量的1/20(50mL)或1/200(5mL),加水稀释，制成培养液。现将制备培养基母液所需的备类物质的量列出，供配制时使用。大量元素(母液I)mg/LNH4N0333000心0338000CaC12・2H208800MgS04・7H207400KH2P043400微量元素（母液II）KI166H3B031240MnS04・4H204460ZnS04・7H201720Na2Mo04・2H2O50CuS04・5H205CoC12・6H205铁盐（母液m）FeS04・7H205
5、560Na2-EDTA・2H207460有机成分（母液IV）WA肌醇20000IVB烟酸100盐酸II比哆醇（维生素B6）100盐酸硫胺素（维生素B1）100甘氨酸400以上各种营养成分的用量，除了母液I为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。上述几种母液都要单独配成1L的贮备液。其屮，母液I、母液II及母液IV的配制方法是：每种母液屮的几种成分称量完毕示，分别用少量的蒸镭水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1Lo母液DI的配制方法是：将称好的FeS04・7H20和Na2-EDTA・2H20分别放到450mL蒸憾水中,边加热边不
6、断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将pH调至5?5,最后定容到1L,保存在棕色玻璃瓶屮。各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室屮。MS培养基中还需要加入：2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）、荼乙酸（NAA）、6-节基瞟吟（6-BA）等植物生长调节物质，并且分别配成母液（0?1mg/mL）o其配制方法是：分别称取这3种物质各10mg,将2,4-D和NAA用少量（1mL）无水乙醇预溶，将6-BA用少量（1mL）的物质的量浓度为0.1mol/L的NaOH溶液溶解，溶解过程需要水浴
7、加热，最后分别定容至100mL,即得质量浓度为0?1mg/mL的母液。配制培养液用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量：母液I为50mL,母液II、III、IVA和IVB备5mL0再取2,4?D5mL、NAA1mL,与各种母液一起放入烧杯屮。MS培养基配制培养液时的注意事项配制培养液时应注意:%1在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放母液的瓶了,如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进行配制;%1用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次；%1量取母液
8、时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1种，划掉1种，以免出错。溶化琼脂用粗天平分别称取琼脂9g、蔗糖30g,放入1000仏的搪瓷量杯屮，再加入蒸镉水750mL,用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，
