不育温度下油菜温敏雄性不育系ssh文库的构建

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1、云南农业大学学报JournalofYunnanAgriculturalUniversity，2014，29(1)：6—10http：／／xb．ynau．edu．cnISSN1004—390X；CODENYNDXAXE-mail：xb@ynau．edu．cnDOI：10．3969／j．issn．1004—390X(n)．2014．01．002不育温度下油菜温敏雄性不育系SSH文库的构建叶晓明，彭少丹，陈升位，陆娜，林良斌(1．云南农业大学农学与生物技术学院，云南昆明650201；2．云南农业大学农科专

2、业实验教学中心，云南昆明650201)摘要：以温敏雄性不育系K121S在可育温度(10℃)下和不育温度(26oC)下三核期花蕾为材料，以可育温度下的cDNA为驱动子，通过抑制性差减杂交技术构建了不育温度下抑制性差减杂交(SSH)文库，其插入片段长度分布在200～1000bp左右，并随机挑选97个阳性菌落测序，得到20个表达序列标签(EST)，包括与ATP合酶B亚基、Rubp羧化酶小亚基同源的EST等，为进一步获得育性转换相关基因和揭示K121S的育性转换分子机理奠定了基础。关键词：油菜；温敏雄性不育

3、；抑制性差减杂交；文库中图分类号：S634．302．2文献标志码：A文章编号：1004—390X(2014)01—0006—05SSHlibraryConstructionofBrassicajunceaL．Thermo·sensitiveMale-sterileLineatSterileTemperatureYEXiaoming，PENGShaodan，CHENShengwei，LUNa，LINLiangbin(1．CollegeofAgronomyandBiotechnology，YunnanA

4、griculturalUniversity，Kunming650201，China；2．ExperimentalTeachingCenterforAgriculturalProfessionalCourse，YunnanAgriculturalUniversity，Kunming650201，China)Abstract：Inthisstudy，usingflower—budatthinueleatestagefromthermo-sensitivemale-sterilelineK121S(Bra

5、ssicajuncea)atfertiletemperatureandsteriletemperatureasmaterial，SSHlibrarywasconstructedwithdrivercDNAobtainedatmale—fertiletemperature．Ninety—sevencloneswerechosenrandomlyinsequencing．TwentyESTwerediscoveredanalogoustogenessuchasATPsynthetasesub—unitb

6、eta，ribulose一1，5-bisphosphatecarboxylasesmallsubunit．ThesizeoftheDNAinsertedrangesfrom200to1000hp．ThelibrarylaidthefoundationofobtainingofthegenesforfertilityconversionandclarificationofmolecularmechanismofK121Sfertilityconversion．Keywords：rapeseed；the

7、rmo-sensitivemalesterility；suppressionsubtractivehybridization；library作物杂种优势利用是增高作物产量的重要途材料有细胞质负效应、育性不稳定、恢复源稀有径。目前油菜杂种优势利用的途径有细胞质雄性及胞质单一化等缺点，转育困难，不易得到优良不育、细胞核雄性不育、光温敏雄性不育、自交不育系。而利用光温敏不育进行育种不仅选育程不亲和系、化学杀雄等。细胞质雄性不育是油菜序简单、不需要保持系、组配自由、育种周期短，杂种优势利用的主要途径，但是细

8、胞质雄性不育而且选配出的杂交种表现出明显的优势⋯。因收稿日期：2013—05—21修回日期：2013—09—04网络出版时间：2014—01—0710：17基金项目：国家自然科学基金项目(31160289)。作者简介：叶晓明(1986一)，男，河北大名人，在读硕士研究生，主要从事生物化学与分子生物学研究。E—mail：yexiaoming1232006@126．corn通信作者Correspondingauthor：林良斌(1963一)，男，湖南武冈人，教授，主要从事