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时间：2020-04-03
《PCR引物设计及软件使用技巧.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
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5、*D(）的引发效率，引物及产物的N"含量可以直接提交模板序列到特定网页，得到设计好的引（E0)S0I*D*0C），等等。必要时还需对引物进行修饰，物，也可以在本地计算机上运行引物设计专业软件。如增加限制性内切酶位点，引进突变等。根据有关一般来说，专门进行!"#引物设计的专业软件功能更参考资料和笔者在实践中的总结，引物设计应注意为强大，但使用起来却不太容易。本文将就引物设计如下要点：原则及软件使用问题进行探讨。（$）引物的长度一般为$+[7%HS，常用的是$:[&5HS，但不应大于7:HS，因为过长会导致其延伸温度［&］$引物设计的原则大于53，不适于96、进行反应。（&）引物序列在模板内应当没有较高相似性片段，尤其是7’端相似性较高的序列，否则容易导致引物设计有7条基本原则：首先引物与模板的错配。引物7’端出现7个以上的连续碱基，如NNN序列要紧密互补；其次引物与引物之间避免形成稳［&］或"""，也会使错误引发机率增加。定的二聚体或发夹结构；再次引物不能在模板的非（7）引物7’端的末位碱基对97、：生物信息学。9(-：%$%615518:&%，;6)<*-：=>?@A&17BC(DBEC!通讯作者：高燕宁，研究员，9(-：%$%61551$8:5，;6)<*-：>C/<0AFGH()BE*E<)IB;/6;>”还具有同源性分析功能高于其他"个碱基，因此应当避免在引物的"’端使［"，#］用碱基!。另外，引物二聚体或发夹结构也可能（），但并非其特长，在此略过。此外，该软导致$%&反应失败。’’端序列对$%&影响不太大，［(］件还有一些特殊功能，其中
6、进行反应。（&）引物序列在模板内应当没有较高相似性片段，尤其是7’端相似性较高的序列，否则容易导致引物设计有7条基本原则：首先引物与模板的错配。引物7’端出现7个以上的连续碱基，如NNN序列要紧密互补；其次引物与引物之间避免形成稳［&］或"""，也会使错误引发机率增加。定的二聚体或发夹结构；再次引物不能在模板的非（7）引物7’端的末位碱基对97、：生物信息学。9(-：%$%615518:&%，;6)<*-：=>?@A&17BC(DBEC!通讯作者：高燕宁，研究员，9(-：%$%61551$8:5，;6)<*-：>C/<0AFGH()BE*E<)IB;/6;>”还具有同源性分析功能高于其他"个碱基，因此应当避免在引物的"’端使［"，#］用碱基!。另外，引物二聚体或发夹结构也可能（），但并非其特长，在此略过。此外，该软导致$%&反应失败。’’端序列对$%&影响不太大，［(］件还有一些特殊功能，其中
7、：生物信息学。9(-：%$%615518:&%，;6)<*-：=>?@A&17BC(DBEC!通讯作者：高燕宁，研究员，9(-：%$%61551$8:5，;6)<*-：>C/<0AFGH()BE*E<)IB;/6;>”还具有同源性分析功能高于其他"个碱基，因此应当避免在引物的"’端使［"，#］用碱基!。另外，引物二聚体或发夹结构也可能（），但并非其特长，在此略过。此外，该软导致$%&反应失败。’’端序列对$%&影响不太大，［(］件还有一些特殊功能，其中
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