《肺癌相关抗原RNA转染树突状细胞诱导细胞因子诱导的杀伤细胞杀伤活力的体外研究》.pdf

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1、医技杂志2015年7月第22卷箜2J0塑￡￡堕￡iges!Y21!：22N011·695·肺癌相关抗原RNA转染树突状细胞诱导细胞因子诱导的杀伤细胞杀伤活力的体外研究湖南省怀化市第二人民医院(41800O)刘伯轩戴北鸿向启德廖东承高细强吴玉兰周频【摘要】目的研究NCI．H1975人肺腺癌细胞株相关抗原RNA转染的人树突状细胞(DCs)在体外诱导细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对人肺腺癌细胞的杀伤活力。方法使用血细胞单采机采集外周血单个核细胞(PBMCs)并利用密度梯度离心法纯化获得的单个核细胞，细胞培养瓶贴壁获得单核细胞，添加重

2、组人粒细胞、巨噬细胞集落刺激因子(rhGM—CSF)和重组人白细胞介素．4(rhIL．4)诱导为未成熟DCs，提取NCI．H1975细胞总RNA转染DCs后诱导为成熟DCs。转染诱导后成熟DCs与PBMCs培养的CIK细胞混合培养后诱导，再次与靶细胞混合培养以观察杀伤活力。实验分转染肺癌相关抗原RNA的DC—CIK组、未转染DC—CIK组及转染空脂质体DC—CIK组，分别采用流式细胞分析法检测DC及CIK细胞表面抗原表达、采用CSFE腆化丙啶(PI)荧光双标法检测3组杀伤肿瘤活性的差异。结果转染相关抗原RNA组、未转染组及转染空

3、脂质体组的DC及CIK细胞表面抗原表达明显上调，转染相关抗原RNA组与其他2组对肺癌原代细胞杀伤活力明显增强。结论肺癌相关抗原RNA转染DC诱导CIK细胞对靶细胞的杀伤活力明显增强，可为临床应用个体化DC．CIK细胞过继免疫治疗提供新的方法。【关键词】树突细胞；细胞因子诱导杀伤细胞；免疫疗法，过继；腺癌，细支气管肺泡StudyoflungcancerassociatedantigenRNA-transfectedDC-inducedcellkiltingactivityofCIK／nvitroLiuBoxuan，DaiBeiho

4、ng，XiangQide，LiaoDongcheng，GaoXiqiang，WuYulan，Zhoun．PeoplesHospitalofHuaihuaC，HuI／M,／t418000，China【Abstract】objectiveToinvestigatetheNCI．H1975humanlungadenocarcinomacel1lineassociatedantigenRNA—transfectedhumandendriticcells(DCs)irtvitrocytokine—inducedkiller(CIK)act

5、ivityinducedkillercellstocancercells．MethodsUsingbloodcellapheresismachinecollectingperipheralbloodmononuclearcells(PBMCs)andusingmononuclearcellsbydensitygradientcentrifugationpurified，celcultureflasksadherentmononuclearcells，addingrecombinanthumangranulocyte—macrop

6、hagecolony—stimulatingfactor(rhGM—CSF)andrecombinanthumaninterleukin一4(rhlL一4)toinduceimmatureDCs，extractionoftotalRNANCI．H1975cellsweretransfectedDCsinducedtomatureDCs．Atiertransfectioni~ducematureDCsandPBMCsculturedCIKcellsinducedmixedculture，mixedculturewithtarget

7、cellsagaintoobservethedestructionofvitality．TheexperimentalpointsassociatedantigenRNA．transfectedDC．CIKgroupoflungcancer，non—transfectedDC—CIKgroupandtransfectedwithemptyliposomesDC—CIKgroupweredetectedbyflowcytometryanalysisDCandCIKcellsurfaceantigenexpression，using

8、CSFE／PIdoublestainingwasusedtodetectdifferencesinanti—tumoractivityofthethreegroups．ResultsRNA．associatedantigentransfectedgroup，DC