[精品]蝴蝶兰的组织培养.doc

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1、蝴蝶兰的组织培养蝴蝶兰属单茎类兰花，其常规繁殖方法有分株法和播种法。在常规繁殖屮，有三个难以解决的问题：第一，用分株繁殖方法增殖缓慢，不利于新詁种的推广；第二，种子繁殖困难，因兰花种子十分微小，胚很细弱，种子屮几乎没有贮藏营养物，在自然条件下，绝大多数种子会在发芽过程屮夭折，只有少数种子遇到菌根才能萌芽；第三，病毒感染严重，降低种性。采用无菌播种和组织培养的方法进行蝴蝶兰的无性系繁殖，可以在一定程度上解决上述三个问题，成为FI前大量繁殖蝴蝶兰的主要途径。外植体的选择和消毒取蝴蝶兰花梗在自来水下用

2、细软毛刷轻刷表面，并吸干表面水分，剪成2一3cm长的茎段。在工作台上按以下程序进行灭菌处理：将材料放入经高温灭菌过的烧杯屮；加入70%的酒精浸泡20秒；0.1%的HgCl消毒8分钟，分2次进行，每次4分钟，灭菌后用无菌水冲洗5次，每次2分钟；用解剖刀切除坏死部分后，接入培养基。用此方法既能有效地消毒乂不会对培养材料产生毒害，培养材料接入培养基后无褐化坏死现象出现。无菌材料的试管培养培养材料的选择是蝴蝶兰组培决繁的关键。腋芽节位以下第3、4节花梗芽是最适宜的外植体，而谷胧甘肽200mg/L既能很好

3、地抑制褐化，又能促进试管苗的生长和分化，是蝴蝶兰组织培养屮最合适的褐化抑制剂。B54-GA32.0mg/L+NAAO.lmg/L是较适宜的愈伤组织诱导培养基，B5+6BA1.Omg/L+NAAO.2mg/L是较适宜的分化培养基，1/2MS+IBA1.2mg/L+NAA0.05mg/L及2%蔗糖是较适宜的生根培养基。将消毒后的无菌培养材料接种在愈伤组织诱导培养基上，其培养基为B5+GA32.Omg/L+NAAO.lmg/L,培养基pH调至5.8,培养室温度控制在24士2°C。接种后遮光放置4-5天

4、，而后每天光照12小时，2周后，切口处开始膨大，产生淡绿色瘤状愈伤组织，并不断增大。4周后将愈伤组织切下转接到分化培养基B5+6BA1.Omg/L+NAAO.2mg/L上，转瓶后愈伤组织的体积和重量成指数级增加，4周左右愈伤组织表面出现较犬绿色颗粒，并形成芽点，继而分化出从生芽。分化吋出现褐化现象，可加入20omg几谷胧甘肤解除。当丛生苗长到3-4cm.具有4一5片叶时，将其移到生根培养基l/2Ms+IBAl・2mg/L十NAAO.05mg/L2%蔗糖丄，10天后切口基部开始出现白色的根状突起，

5、25天后，每株生根4条以上，生根率为95%以上。试管苗的炼苗移栽试管苗移栽前需要有炼苗的过程，移栽前5天左右，在室内将封口膜打开1/3左右，使幼苗与空气有一定接触。2天后，移栽到驯化温室内，使幼苗完全暴露在空气屮，要适当遮阳，避免高温和强光直接照射，3天后即可移栽。移栽时将幼苗取出，放在1000倍的多菌灵水溶液屮小心洗去根部的培养基，去掉老叶，放入铺有湿报纸的盒子，要注意保湿。栽培基质为经过高温消毒后的苔鲜，用银子划痕后，夹住幼苗根部，插入至第1轮叶，用手小心压紧，用薄膜覆盖，保持温度在21-2

6、5°c,相对湿度60%—80%,控制好水分和温度，移栽成活率可达90%以上。当新叶长出、新根伸长吋，每周用0.3%-0.5%磷酸二氢钾进行叶而施肥1次，成苗率达80%以上。组织培养的优点：可以在不受植物体其它部分干扰下研究被培养部分的生长和分化的规律，并且可以利用各种培养条件影响它们的生长和分化，以解决理论上和生产上的问题。有力地推动了生物科学屮植物生理学、生物化学、遗传学、细胞学、形态学以及农、林、医、药等各门学科的发展和相互渗透，促进了营养生理、细胞生理和代谢、生物合成、基因转移、基因重组的

7、研究。蝴蝶兰蝴蝶兰单子叶植物纲天门冬F1兰科蝴蝶兰属，于1750年发现，已发现七十多个原生种，大多数产于潮湿的亚洲地区。在屮国台湾和泰国、菲律宾、马来四亚、印度尼西亚等地都有分布。其屮以台湾出产最多。蝴蝶兰展是著名的切花种类,蝴蝶兰是单茎性附生兰，茎短，叶大，花茎一至数枚，拱形，花大,因花形似蝶得名。其花姿优美，颜色华丽，为热带兰屮的珍品，有“兰屮皇后”之美誉。蝴蝶兰约100利「，原产欧亚、北非、北美和屮美。两个很有名的种：二叶舌唇兰开白花，植株较小；绿花舌唇兰花大，绿白色，株形也较大。两者均有

8、5〜15朵花，芳香，簇生成穗状花序。蝴蝶兰茎很短，常被叶鞘所包。叶片稍肉质，常3〜4枚或更多，正面绿色，背面紫色，椭圆形，长圆形或镰刀状长圆形，长10〜20厘米，宽3〜6厘米，先端锐尖或钝，基部楔形或有时歪斜，具短而宽的鞘。花序侧生于茎的基部，长达50厘米，不分枝或有时分枝；花序柄绿色，粗4〜5毫米，被数枚鳞片状鞘;花序轴紫绿色，多少回折状，常具数朵由基部向顶端逐朵开放的花；花苞片卵状三角形，长3〜5毫米；花梗连同子房绿色，纤细，长2.5〜4.5厘米；花白色，美丽，花期长；屮萼片近椭圆形，长2.