甘蔗宿根矮化病菌PCR检测体系的优化与应用.pdf

《甘蔗宿根矮化病菌PCR检测体系的优化与应用.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、10.3969/j.issn.1004-390X(n).2011.05.003甘蔗宿根矮化病菌PCR检测体系的优化与应用李文凤卢文洁黄应昆王明强王晓燕罗志明云南省农业科学院甘蔗研究所，云南省甘蔗遗传改良重点实验室，云南开远661600摘要：为建立能快速灵敏检测甘蔗宿根矮化病（ratoonstuningdisease，RSD）的PCR检测方法。本文通过改进模板DNA的制备方法，在PCR基本程序的基础上，以甘蔗宿根矮化病菌（Leifsoniaxylisubsp.xyli，Lxx）16S-23SrDNA基因间隔区特异性引物，调整PCR扩

2、增反应体系各组分的浓度、反应的退火温度、循环参数等主要因子，优化PCR反应体系。此检测体系能从感染RSD的样品中扩增出大小为438bp的特异性片段，而阴性对照和未感染样品则未扩增出任何片断；未优化仅从稀释30倍的蔗汁总DNA中扩增出RSD的特异性片段，优化后可以从稀释3000倍的蔗汁总DNA中扩增出RSD的特异性片段。对31份田间采集样品检测，未优化的阳性检出率为32.26％；优化后阳性检出率74.19％，与I-ELISA检测结果一致。应用此检测方法可稳定、快速地检测出蔗株是否感染RSD，且检测效率高，适合于田间大批量样品快速检测

3、。甘蔗宿根矮化病菌；PCR检测；16S-23SrDNA;间接酶联免疫吸附法S435.661A1004-390X(2011)05-0598-04OptimizationandApplicationofPCRDetectionforLeifsoniaxylisubsp.xyli,theCausalBacteriumofSugarcaneRatoonStuntingDiseaseLIWen-fengLUWen-jieHUANGYing-kunWANGMing-qiangWANGXiao-yanLUOZhi-ming2010-06-262

4、011-03-21现代农业产业技术体系建设专项资金（CARS-20-2-2）；公益性行业（农业）科研专项资金(nyhyzx07-019)；云南省人才培养项目(2008PY087)。李文凤（1964-），女，云南石屏人，副研究员，主要从事甘蔗病害研究。E-mail:ynlwf@163.com黄应昆（1964-），男，云南建水人，研究员，从事甘蔗病害防控研究。E-mail:huangyk64@163.com节，用砍刀2.4大@@[1]陈庆龙.世界甘蔗病害[M].北京：农业出版社，1982:299-319.@@[2]黄孟群，肖镇杰.广东

5、甘蔗宿根矮化病调查报告[J].甘蔗糖业，1987(2):39-40.@@[3]郑加协，甘勇辉.福建甘蔗宿根矮化病的发生及其诊断[J].甘蔗糖业，1998(5)：20-24.@@[4]邓展云，王伯辉，刘海斌，等.广西甘蔗宿根矮化病的发生及病原检测[J].中国糖料，2004(3)：35-38.@@[5]黄应昆，李文凤，赵俊，等.云南甘蔗宿根矮化病病原检测[J].云南农业大学学报，2007，22(5)：25-28.@@[6]李文凤，黄应昆，卢文洁，等.甘蔗宿根矮化病的IELISA快速检测[J].中国糖料，2008(1)：33-34.@@

6、[7]周凌云，周国辉.甘蔗宿根矮化病菌PCR检测技术研究[J].广西农业生物科学,2006，25(2):172-174.@@[8]沈万宽，周国辉，邓海华，等.甘蔗宿根矮化病菌PCR检测及目的片段核苷酸序列分析[J].中国农学通报，2006，22(12)：413-416.@@[9]张显勇，蔡文伟，杨本鹏，等.甘蔗花口病和宿根矮化病多重PCR检测方法的建立[J].中国农业科学，2008,41(12):4321-4327.@@[10]PAOYB,GRISBAMMP,BUROERDM,etal.Apolymerasechainreacti

7、onprotocolforthedetectionofClaibacterxylisubsp.xyli,thecausalbacteriumofsugarcaneratoonstuntingdisease[J].PlantDisease,1998,82(3):285-290.甘蔗宿根矮化病菌PCR检测体系的优化与应用作者：李文凤，卢文洁，黄应昆，王明强，王晓燕，罗志明，LIWen-feng，LUWen-jie，HUANGYing-kun，WANGMing-qiang，WANGXiao-yan，LUOZhi-ming作者单位：云南省

8、农业科学院甘蔗研究所,云南省甘蔗遗传改良重点实验室,云南开远661600刊名：云南农业大学学报英文刊名：JournalofYunnanAgriculturalUnversity年，卷(期)：2011,26(5)被引用次数：2次参考文献(10条)1.