毕业论文--贵州西南蔗区甘蔗宿根矮化病调查

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1、-5-：贵州西南蔗区甘蔗宿根矮化病调查贵州西南蔗区甘蔗宿根矮化病调查摘要：为了解贵州西南蔗区甘蔗宿根矮化病发病情况，应用PCR技术对该蔗区的甘蔗样品进行宿根矮化病检测。结果表明：贵州西南蔗区的13个甘蔗主要栽培品种和主推品种，共118个样品中有98个样品检出RSD，阳性检出率为83.05%；其中粤糖00-236，巴西45，罗汉蔗，拔地拉，黔糖3，ROC21等6个品种发病较严重，阳性检出率高达100%；其余7个品种也均发病，阳性检出率在42.86%～90.00%之间。关键词：甘蔗；宿根矮化病；PCRþASurveyofSugarcane

2、RatoonStuntingDiseaseinSouthwestGuizhouAbstract:Theaimofthisworkwastoinvestigateofsugarcaneratoonstuntingdisease(RSD).SugarcanesamplesfromdifferentcaneareasinsouthwestGuizhouweredetectedbyPCRtechnology.Theresultsshowedthatamong13sugarcanevarietiesincludingmajorplantvari

3、etiesandmainrecommendedvarieties,98samples(83.05%)of118sampleswereRSDpositive.ThesixvarietiesofYuetang00-236,Brazil45,Luohancane,Badila,Qiantang3andROC21wereseriouslyinfected,positivedetectionrateswereashighas100%.Therestofthe7varietieswerealsoinfected,positivedetection

4、ratesbetween42.86%~90.00%.Keywords:Sugarcane;Ratoonstuntingdisease;PCR0引言甘蔗宿根矮化病(RatoonStuntingDisease,RSD)是目前世界上最为严重的甘蔗病害之一。该病害最早于1944～1945年在澳大利亚昆土兰州甘蔗品种Q28上发现[1]。目前，RSD在巴西、印度、南非、美国等甘蔗主要生产国和地区均有报道。1986年，我国广东首次确诊甘蔗RSD[2]，随后在我国其他甘蔗主产区广西、福建、海南、云南等地普遍发现RSD发生。RSD由一种木质部寄生细菌L

5、eifsoniaxylisubsp.xyli(Lxx)引起[3]，主要通过带病蔗种和砍蔗工具传播，一般造成甘蔗减产12%～37%(干旱时减产甚至高达60%以上)，糖分降低0.5%（绝对值），宿根年限缩短1～2年[4-5]。甘蔗感病症状不易从外表判断，发病严重时出现植株矮化，蔗茎变细、分蘖减少、生长缓慢等症状；其内部在近基部节维管束上出现粉红色或橘红色的小圆点或痘点[6]。随着RSD检测技术的提高及完善，其经历了内部症状诊断─显微镜法─免疫学检测─PCR检测等阶段[7-10]，其中，PCR检测技术是一项灵敏度高、特异性好的分子检测技术。

6、优化的PCR能从稀释1000倍的Lxx基因组DNA(15.9pg/μL)中检测到Lxx[11-12]。由于受土地资源限制，我国大部分蔗区已连作15～20年以上。长期连作加剧了RSD发病率，严重威胁甘蔗安全生产。近年来，我国大部分蔗区开展了甘蔗样品RSD发病情况调查研究，但针对贵州蔗区的RSD发病情况调查尚未见报道。本研究在前人的研究基础上应用PCR技术对贵州西南蔗区13个常见品种RSD发病情况展开调查。1材料与方法1.1样品采集在贵州西南主要蔗区兴义、贞丰、册亨、望谟等地采集甘蔗样品，包括主栽品种8个和主推品种5个，共13个品种118

7、个样品。所有样品均为随机取样，每个样品5～10株，取成熟期蔗茎基部倒数第2～3节，蔗茎采集时要严格避免样品之间的交叉污染，对于不同植株砍刀均用70%酒精消毒，截取的蔗茎去皮后切成2～3mm大小的颗粒，置于-70℃冰箱保存待用。-5-：贵州西南蔗区甘蔗宿根矮化病调查1.2实验方法1.2.1DNA提取取50～100mg样品用液氮充分研磨，用天根快捷型植物基因组DNA提取试剂盒提取蔗茎DNA。1.2.2PCR检测使用Pan等报道的Lxx16S～23SrDNA基因间隔区(ITS)特异引物：上游引物Lxx1：ACCCTGTGTTGTTTTCAA

8、CG；下游引物Lxx2：CCGAAGTGAGCAGATTGACC；以上引物由上海生工生物工程有限公司合成，其预期扩增产物长度为438bp[13]。PCR反应体系：DNA模板1.0μL，Lxx1和Lxx2(10mmol/L