植物总RNA提取研究进展.pdf

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1、林业科学现代农业科技2014年第18期植物总RNA提取研究进展付占成李艳赵红星(’河南省汝南县南余店乡农业服务中心，河南汝南463300；。驻马店市农业科学院)摘要植物总RNA的提取尽管已成为一种常规的技术，但由于不同植物化学组分的差异，没有一种特定的方法适用于所有植物RNA的提取。该文介绍了异硫氰酸胍法、改进CTAB法、改进SDS法和Trizol试剂盒法提取植物总RNA的特点。关键词总RNA提取；Trizol试剂盒法：改进SDS法中图分类号Q522文献标识码A文章编号1007-5739(2014)18-0168—01ResearchP

2、rogressofIsolationofPlantTotalRNAFUZhan—chengLIYanZHAOHong—xing(AgriculturalServiceCenterofNanyudianTownshipinRunanCountyofHenanProvince，RunanHenan463300；ZhumadianInstituteofAgriculturalSciences)AbstractAlthoughtheisolationoftotalRNAhasbecomeacommonmethod．thereisnotyetan

3、idealmethodfortheisolationoftotalplantRNAduetothedJiferentchemicalcompositionsofplant．，I’}leguanidiniumthiocyanatemethod，modifiedCTABmethod．modifiedSDSm~hodandt0talRNAextractionkit0fzolwerein~oducedtoisolatehighpurityandintegrityRNAfromplant．KeywordstotalRNAextraction：to

4、talRNAextractionkit0fIzol：modifiedSDSmethodRNA是植物分子生物学研究的重要对象之一。从植物CTAB裂解苹果材料，与细胞中的核酸形成核酸一CTAB复中获得高质量的RNA是后续RT—PCR、Northern杂交、合体，然后用氯仿／异戊醇去除细胞裂解液中的蛋白质，最后cDNA文库构建等分子生物学研究的基础。目前，提取RNA采用LiC1选择性沉淀其中的RNA。的方法有Trizol试剂快速提取法[1】、苯酚法阁、异硫氰酸胍法[313改进SDS法和CTAB法[41等。植物总RNA的提取已发展了许多较为成S

5、DS(十二烷基硫酸钠)是强蛋白质变性剂，对RNA酶熟的方法，但每种方法都各不相同，所得RNA的质量也有有较强的抑制作用。改进SDS法中高浓度的SDS具有强烈差异，不过其基本原理都是将细胞破碎后，将RNA与多糖、的细胞裂解和去污作用，使核酸彻底释放出来。提取缓冲液蛋白质、DNA等杂质分离开嘲。不同植物或同种植物的不同同时加入2．0％水溶性PVP和2．0％8一巯基乙醇，二者协同器官或组织，影响RNA提取的因素也不同，常规提取法效作用，使多酚类物质不易被氧化成醌类。因此，PVP和p一巯果不佳闾。由于RNA自身稳定性差，分离时易被RNA酶降基乙

6、醇能有效抑制酚类氧化。改进SDS法简单易操作，成功解，或受多酚、多糖和蛋白质以及其他次生代谢物质影响。率较高，使用范围广泛，且经济实用。王玉成等唧曾经介绍过因此，能否有效地去除多糖、酚类化合物、RNase和干扰RNA一种适用范围广泛的总RNA提取方法，该方法以SDS、氯提取的其他代谢产物是提取高质量总RNA的关键。仿为主要提取试剂，以LiC1和乙醇为RNA沉淀试剂，分别1异硫氰酸胍法以柽柳(木本植物)、星星草(草本植物)、天牛(昆虫)、酿酒异硫氰酸胍主要是作为离液剂和强变性剂，高浓度强变酵母和白腐菌(真菌)为RNA提取材料，用该方法成功

7、地提性剂异硫氰酸胍使细胞结构迅速被破坏，且使蛋白质变性，取出了它们的总RNA。从而使RNA释放出来；高浓度异硫氰酸胍还使细胞内的4Trizol试剂盒法RNA酶失活，使释放出的RNA不被降解。酸性条件下DNATrizol是一种新型总RNA抽提试剂，内含有苯酚、异硫极少发生解离，同蛋白质一起变性被离心下来。RNA则溶于氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞中的核酸酶，直上清。采用异硫氰酸胍法提取总RNA时，与其他方法不同接提取出完整的总RNA。Trizol试剂盒法提取总RNA的效的是该方法在木本植物细胞破碎时酚类物质被释放届极易果很稳定，而

8、且其操作还具有简单、方便、快捷等优点，但氧化成褐色，最终RNA沉淀也呈褐色。Schneiderbauer等【7]Trizol试剂盒价格较高，实验室进行大量RNA抽提时成本认为，这些氧化物可以与核酸不可逆地结