疫苗株RT-PCR鉴别诊断方法的建立-论文.pdf

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1、6中国兽医杂志2014年(第50卷)第6期ChineseJournalofVeterinaryMedicine猪流行性腹泻病毒野毒株／疫苗株RT—PCR鉴别诊断方法的建立李长龙，陈建飞，张鑫，时洪艳，冯力(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨150001)摘要：开放阅读框3(Openreadingframe3，ORF3)是猪流行性腹泻病毒(PEDV)基因组中的惟一辅助基因。前期研究表明，PEDV疫苗株的ORF3在245~293位缺失49个核苷酸。在ORF3缺失区域两端设计合成引物建立反转录

2、一聚合酶链反应(RT—PCR)可以对PEDV野毒株和疫苗株进行鉴别诊断，野毒株扩增产物为319bp，疫苗株扩增产物为270bp。用该鉴别诊断方法对猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒和猪繁殖和呼吸综合征病毒的cDNA进行扩增均无特异性条带，说明该方法特异性强。现地病料的检测结果表明，该鉴别诊断方法能够区分PEDV野毒和疫苗株，而且可以排除其他病毒的影响，有助于减少免疫猪被淘汰的可能，降低经济损失。关键词：猪流行性腹泻病毒；ORF3；RT-PCR；鉴别诊断中图分类号：$852．651文献标志码：A文章编号：0529—6

3、o05(2014)06—0c)f16—03EstablishmentofRT-PCRmethodfordistinguishingwildPEDVfromtheattenuatedstrainLIChang—long，CHENJian·fei，ZHANGXin，SHIHong—yan，FENGLi(DivisionofSwineInfectiousDiseases，StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology，HarbinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAc

4、ademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，China)Abstract：Openreadingframe3(ORF3)istheonlyaccessorygeneintheporcineepidemicdiarrheavires(PEDV)genome．Pre-viousstudyindicatedthatORF3ofPEDVvaccinestrainhada49一ntdeletionatnt245—293．Areversetranscription—polymerasechainreaction

5、(RT—PCR)methodwasdevelopedtodistinguishwildPEDVfromthevaccinestrainbyusingapairofprimers．ThePCRproductsofwildstrainsareof319bpinsize，whilethoseofthevaccinestrainareof270bpinsize．NoPCRproductsweream—plifiedfromthecDNAsofswinetransmissiblegastroenteritisvirus(TGEV)，porcine

6、rotavirus(PoRV)，classicalswinefevervirus(CS·FV)，porcinepseudorabiesvirus(PPV)andporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus(PRRSV)，respectively．Theresultsin—dicatthatthismethodhasgoodspecificityforPEDV．Theresultsofthedetectionoffieldsamplesindicatedthatthismethodcanef

7、fec．tivelydistinguishwildPEDVfromthevaccinestrainandreducetheeconomiclosses．Keywords：Porcineepidemicdiarheavirus；ORF3；RT-PCR；DifferentialdiagnosisCorrespondingauthor：FENGLi猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒混合感染呈现大规模流行。现地病料检测结果表(PEDV)引起的以仔猪腹泻、呕吐和脱水为主要症明，2010—2011年我国部分地区PEDV的感染率高状的一种急性

8、、高度接触性肠道传染病。PED在达54．7％，远高于猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)世界范围内广泛流行，1978年首次在英国和比利(38．1％)和猪轮状病毒(PoRV)(5．04％)的感染率j，时暴发”t。我