枯草芽孢杆菌常用培养基配方.doc

《枯草芽孢杆菌常用培养基配方.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、枯草芽抱杆菌常用培养基配方枯草芽抱杆菌常川培养基配方：11蒸啊水+20g簡萄糖+15g蛋白豚+5g氯化钠+0.5g牛肉#+20g琼脂枯草芽砲杆菌原生质体的制备1培养枯草芽抱杆菌取亲木菌株14412.吃新鲜斜血分别接一环到装有液体完全培养基(cm)的试管屮，36°C振荡培养14h,各取1ml菌液转接入装有20ml液体完全培养基的250ml锥形瓶屮，36°C振荡培养3h,使细胞生长进入对数前期，各加入25u/ml青霉素，使其终浓度为0.3u/ml,继续振荡培养2h。2.收集细胞各取菌液10ml,4000r/min离心10min,弃上清液，将菌体悬浮于磷酸缓冲液屮，离心。如此洗涤两次,将菌体悬

2、浮10mlsmm中,每ml约含108〜109活菌为宜。3.总菌数测定各取菌液0.5ml,用生理盐水稀释，取10-5.10-6、10-7每稀释度作两个平板)、倾注完全培养基，36°C培养24h后计数。此为未经酶处理的总菌数。4.脱壁二株亲木菌株务取5ml菌悬液，加入5ml溶菌酶溶液，溶菌酶浓度为100ug/ml,混匀后于36°C水浴保温处理30min,定时取样，镜检观察原生质体形成情况，当95%以上细胞变成球状原生质体时，用4000r/min离心10m泊，弃上清液，用高渗缓冲液洗涤除酶，然后将原生质体悬浮于5ml高渗缓冲液屮。立即进行剩余菌数的测定。5.剩余菌数测定取0.5ml上述原生质体

3、悬液，用无菌水稀释,使原生质体裂解死亡，取10-2.10-3.10-4稀释液各0.1ml,涂布于完全培养基平板上，36°C培养24-48h,生长出的菌落应是未被酶裂解的剩余细胞。计算酶处理麻剩余细胞数，并分别计算二亲株的原生质体形成率。原生质体形成率=未经酶处理的总菌数一酶处理后剩余细胞数。