分枝杆菌的实验室诊断.pdf

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1、医学杂志2014年3月第37卷第3期ChinJLabMed，March2014，Vo1．37．No．3·239·．继续教育．分枝杆菌的实验室诊断周珍文分枝杆菌(Mycobacterium)种类较多，可分为结核分枝杆分枝杆菌呈菌膜状生长。菌复合群、非结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌3类。分枝杆菌2．自动培养法：BACTECMGIT960全自动分枝杆菌培的细胞壁含有大量分枝菌酸，染色后能抵抗强脱色剂盐酸乙养鉴定系统(美国BD公司)采用荧光增强原理，在MGIT培醇的脱色，故又称抗酸杆菌。结核分枝杆菌(M．tuber

2、culosis，养管底部包埋对培养管内氧气浓度高度敏感的荧光指示剂。MTB)是引起结核病的病原菌，可侵犯全身各器官，但以肺结当液体培养管内有分枝杆菌生长时，氧气被消耗，荧光显示核为最多见。结核病至今仍为重要的传染病，据WHO报剂在二极管的激发下发出荧光，当荧光强度呈现加速度变化道，每年约有800万新病例发生，约300万人死于该病。近时系统将以生长单位形式(GU)报告该标本为阳性。分枝杆年来，因艾滋病、吸毒等社会原因及免疫抑制剂的应用，其发菌快速培养阳性标本平均检出时间为9d；鉴定、药敏试验平病率呈上升趋

3、势。均时间为4d。全自动培养系统具有无交叉污染，连续监测涂片抗酸染色镜检为分枝杆菌诊断的最普遍方法，但敏标本，准确的数据处理系统等优点，是敏感、高效的分离分枝感度较低。发光二极管显微镜可检测荧光染色，提高了涂片杆菌的方法。镜检的敏感度，是WHO推荐的代替传统显微镜涂片镜检的三、分子生物学方法新方法。由于结核分枝杆菌生长缓慢，传统培养法耗时较长1．PCR：PCR扩增靶序列包括IS6110插入序列、65kDa(4—8周)，自动液体培养法可缩短检测周期至9d左右。分枝杆菌热休克抗原靶序列等，但多以IS6110

4、为靶序列，由XpertMTB／RIF、GenotypeMTBDR等分子诊断方法及T细胞于IS6110基因存在重复序列，可使PCR敏感度增加。荧光IFN．释放试验等免疫诊断方法的临床应用，为分枝杆菌的定量聚合酶链反应已广泛应用于分枝杆菌感染的诊断，具有快速诊断提供了新途径。反应快速、重复性好、灵敏度高等诸多优点。一、涂片镜检2．XpertMTB／RIF：使用实时PCR技术自动检测MTB及萋尼染色(Ziehl—Neelson)镜检为检测抗酸杆菌最普遍利福平耐药，通过扩增MTB特异性rpoB基因，并同时使用使

5、用的方法，虽萋尼染色检测抗酸杆菌的特异度高，但敏感分子信标检测利福平耐药决定区突变。MTB／RIF检测平台度差异很大，尤其在肺外结核及HIV感染的结核患者。使(GeneXpe~，美国Cepheid公司)整合了样品处理及PCR过用若丹明6G和金胺染料荧光染色，荧光显微镜检查，其敏程，细菌裂解，核酸提取，扩增、产物检测在一次性检测槽中感度高于传统显微镜萋尼染色，但荧光光源昂贵，荧光显微进行，2h可获得结果，操作简便。国外多中心研究显示，对镜维护成本高及需暗室配套等，限制了其广泛使用。与荧光于涂片阳性标本中，

6、使用此方法的阳性率为98．2％(551／显微镜相比，发光二极管显微镜成本低，其灯泡半衰期更长，561)，涂片阴性标本阳性率为72．5％(124／171)，609例阴性即使灯泡破裂也无毒物释放，并可检测荧光染色，提高了检患者中，仅5例获得阳性结果，特异度为99．2％。对于利福测的敏感度。研究显示J，就检测的特异度，发光二极管显平耐药，其敏感度为97．6％(200／205)，特异度为98．1％微镜方法与传统显微镜及荧光显微镜方法一致，但其敏感度(504／514)[21。XpertMTB／RIF为结核分枝杆菌

7、诊断值得推高于传统显微镜及荧光显微镜法。由于发光二极管显微镜广的快速诊断新方法，尤其在艾滋病高发、MTB耐药普遍的法所具有的优势，WHO推荐使用发光二极管显微镜法代替发展中国家。传统光学显微镜法进行抗酸菌的荧光染色涂片镜检。3．GenotypeMTBDR：MTBDR线性探针杂交(德国Hain二、培养LifescienceGmbH公司)整合了PCR与分子杂交技术，并同1．传统培养法：分枝杆菌生长缓慢，结核分枝杆菌在培时对异烟肼及利福平两种耐药基因突变进行检测，检测时间养基上繁殖一代需15—20h，一般需4

8、—8周或更长时间始约6h。以BACTEC460TB自动培养法及测序法为参照，对见菌落生长。在改良罗氏培养基上，菌落粗糙、凸起、致密，于涂片阳性的标本，MTBDR检测结核的敏感度为94．4％，有表面皱褶，呈颗粒、结节或菜花样，乳白色或米色，无可溶对异烟肼及利福平耐药预测的准确性分别为84．2％、性色素，不透明。在不含表面活性剂的液体培养基中，结核96．2％、4．聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性DOI：10．3760／cma．j．iss