我国云南登革4型病毒减毒株生物学特性及全基因组序列分析-论文.pdf

《我国云南登革4型病毒减毒株生物学特性及全基因组序列分析-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、中国生物制品学杂志2014年8月第27卷第8期ChinJBiologicalsAugust2014．Vo1．27No．8·997基础研究我国云南登革4型病毒减毒株生物学特性及全基因组序列分析陈柠，俞永新，徐宏山，刘欣玉，王志伟，杨立宏，岳广智，贾丽丽，董关木，李玉华中国食品药品检定研究院，北京100050摘要：目的对我国云南登革4型病毒分离株(Banl8)及其减毒株(Banl8HK20和Ban18HK30)的生物学特性进行分析，测定原株和减毒株的全基因组序列并进行比对，分析与毒力相关的位点。方法将各毒株在vero细胞传代后进行空斑形态观察、小鼠脑内致

2、病力和免疫原性检测；减毒株经空斑纯化后，挑选单克隆，检测其小鼠脑内致病力；提取减毒株基因组RNA，RT—PCR法分段扩增其全基因组序列并测序，应用DNAStar软件包进行序列比对分析。结果Banl8HK20和Ban18HK30毒株在Vero细胞上形成的空斑较其原株稍大，但边界较模糊；两个代次的减毒株对KM小鼠不致病，对2～4日龄乳鼠的脑内致病力也明显低于其原株；Banl8原株和Banl8HK20毒株免疫的小鼠经3个剂量的国际标准株H241株脑内攻击后，均无死亡，但Banl8HK30毒株与对照组相比，未显示出保护作用；Banl8HK20毒株的9个克隆株

3、中，3株对乳鼠的脑内致病力低于其他6株克隆株，Banl8HK30毒株的5个克隆株对乳鼠的脑内致病力无明显差异；减毒株的两个代次病毒与其原株存在3个氨基酸[A—v(C．111)、I—T(E一155)、I—L(E一369)]和一个核苷酸[G—A(3’UTR．219)]的共同差异。结论通过原代地鼠肾细胞传代的两个代次(HK20和HK30)病毒对小鼠的脑内致病力明显减弱，其中Ban18HK20免疫原性较好，并从空斑克隆中筛选出3株毒力较Banl8HK20更低的克隆株；C．111、E一155、E一369和3’UTR一219突变与毒力减弱密切相关。关键词：登革4

4、型病毒；Banl8株；减毒株；毒力；免疫原性；序列分析中图分类号：R373．3+3Q789文献标识码：A文章编号：1004．5503(2014)08—0997．06BiologicalcharacteristicsandcompletegenomesequenceofattenuatedstrainsofDenguevirustype4isolatedinYunnan，ChinaCHENNing，YUYong-xin，XUHong—shan，LIUXin-yu，WANGZhi-wei，YANGLi—hong，YUEGuang-zhi，JIALi-li

5、，DONGGuan—mu，LIYu—huaNationalInstitutesforFoodandDrugControl，Beijing100050，ChinaCorrespondingauthor：YUYong-xin，E-mail：yuyongxin@nicpbp．org．cnAbstract：0bjectiveToinvestigatethebiologicalcharacteristicsandcompletegenomeseuqnencesofBan18strainofdenguetype4isolatedinYunnan，Chinaasw

6、ellasitsattenuatedstrainsBanl8HK20andBanl8HK30，andanalyzethevirulence—relatedsites．MethodsThestrainsweresubculturedinVerocells，observedformorphologybyplaqueassay，anddeterminedforintracerebralvirulenceinmiceandimmunogenicity．Theattenuatedstrainswerepurifiedbyplaqueassay，andsingl

7、ecloneswereselectedanddeterminedforintracerebralvirulenceinmice．GenomicRNAsofattenuatedstrainswereextracted，basedonwhichthecompletegenomeswerefragmentallyamplifiedbyRT—PCRandsequenced，andthesequencingresultswereanalyzedbyusingDNAStarsoftware．ResultsBanl8HK20andBanl8HK30strainsf

8、ormedlargebutfuzzyplaquesonVerocellscomparedwiththeirp