大鼠肢体缺血预处理对肝脏缺血再灌注损伤保护作用机制的初步探讨-论文.pdf

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1、2O13年12月中医学报第28卷December2013J0URNAL0FCHINESEMEDICINEVo1．28大鼠肢体缺血预处理对肝脏缺血再灌注损伤保护作用机制的初步探讨张冰】通讯作者谭莉莉2杨永丰张建军1瞿海龙1田占发l1河北大学附属医院急诊科河北保定071000；2河北大学附属医院贵宾病房河北保定071000【摘要】目的观察大鼠肢体缺血预处理(1imbischemicpreconditioning，LIPC)对其肝脏缺血再灌注(ischemiareperfusion，iR)损伤的保护作用及可能的作用机制方法健

2、康雄性SD大鼠5O只，随机分为对照组(control，C)、假手术组(shamoperation，SO)、缺血再灌注组(IR)、肝脏缺血预处理组(hepaticischemicprec0nditioning，HIPC)、肢体缺血预处理组(1imbischemicprec0nditi0ning，LIPC)5组，分别检测ALT、AST水平；脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal-deoxynucleotidyltransferasemediatedd—UTPnickendlabeling，TUNEL)检

3、测肝组织凋亡细胞并计算凋亡指数(apoptosisindex，AI)。结果IR组、HIPC组、LIPC组血清ALT、AsT水平较c组、s0组显著升高(P<0．05)。其中IR组转氨酶升高最明显，与HIPC组、LIPC组比较差异均有统计学意义(P<0．05)。而HIPC与LIPC两组比较差异无统计学意义(P>0．05)。凋亡细胞在s0组罕见，IR组、HIPC组和LIPC组都有明显增加。其中IR组凋亡指数增加最明显，与HIPC组、LIPC组比较差异均有统计学意义(P<0．05)。HIPC与LIPC两组比较差异无统计学意义(

4、P>0．05)。结论肢体缺血预处理与肝脏缺血预处理均可减轻肝脏缺血再灌注损伤，其保护作用机制与抑制肝细胞凋亡有关。【关键词】缺血再灌注；预处理；肝脏；肢体；凋亡【中图分类号]R333．4【文献标识码IB【文章编号】1674—8999(2O13)12-0188—02缺血预处理(ischemicpreconditioning，IPC)是组织或器官在经过1次或表1各组大鼠血清ALT、AST水平(U／L)多次短暂缺血后，对随后长时间的缺血产生耐受的现象。随着缺血预处理研究的进一步深人，发现“远隔器官缺血预处理”现象，即通过对远

5、离靶器官的组织或器官预先进行缺血预处理，同样能够减轻靶器官的缺血再灌注损伤。本研究预先对两组大鼠分别进行肝脏原位缺血预处理和肢体缺血预处理，随后对肝脏实施缺血再灌注，之后对比各组血清转氨酶变化，观察肢体缺血预处理这一远隔器官预处理方式对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用；通过计算肝细胞凋亡指数，初步探讨远隔器官缺血预处理的保护作用机制。与c组比较，(1)P>0．05与sO组比较，(2)P<0．05；与IR组比较，(3)1材料与方法P<0．05；与HIPC组比较，(4)P>0．05。1．1主要试剂AsT、ALT检测试剂盒购于南

6、京建成生物工程研究2．2细胞凋亡检测：凋亡细胞在S0组罕见，在IR组、HIPC组、LIPC所；TUNEL检测试剂盒购于Roche公司。组都有明显增加。IR组、HIPC组、LIPC组凋亡指数与S0组比较差异均1．2实验动物及分组清洁级雄性SD大鼠5O只，体重200—250g，由河有统计学意义(P<0．05)。其中IR组凋亡指数为9．64士1．57，与HIPC北大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(冀)2008-1—0035O只大组、LIPC组比较差异有统计学意义(P

7、，编号，随机分为5组，每组10只：对照组(control，C)、假手术组数分别为4．94士0．42、5．02士0．44，两组比较差异无统计学意义(shamoperation，SO)、缺血再灌注组(isehemiareperfusion，IR)、肝脏缺血预(P>0．05)(表Z)。处理组(hepaticischemicpreconditioning，HIPC)、肢体缺血预处理组(1imbis—表2各组肝细胞凋亡指数()chemicpreconditioning，LIPC)。1．3动物模型的制备：5组大鼠术前12小时均禁食

8、，可自由饮水。①C组：3戊巴比妥钠腹腔内注射麻醉(40mg／kg)，经心脏采集血样待生化检测。②SO组：麻醉同C组，上腹正中开腹，向头侧牵开肝脏，暴露并游离肝十二指肠韧带，腹腔内注射庆大霉素lml、生理盐水2ml，关腹。③1R组：麻醉、开腹、游离肝十二指肠韧带均同SO组，以血管夹夹闭肝十二指肠韧带，致肝缺血30min，然后松开血管