高表达单克隆抗体ER的细胞株筛选.pdf

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1、第35卷第4期长春理工大学学报(自然科学版)Vol-35No．42012年l2月JournalofChangchunUniversityofScienceandTechnology(NaturalScienceEdition)DeC．2O12高表达单克隆抗体ER的细胞株筛选范丽颖，张莹。，于源华(1．长春理丁大学生命科学技术学院，长春130022；2．中美奥达生物技术有限公司，北京100085)摘要：ER为IgG1单克隆抗体，是一种人和鼠的EGFR单克隆抗体的嵌合体。ER是表皮生长因子受体(EGFR)阻止剂，可以竞争性的抑制EGF及其它配体的结合在本课题研究中以CHO细胞为对象，

2、进行细胞驯化，无蛋白培养基的培养，筛选高表达细胞株，旨在通过上述条件优化，提高细胞密度和单抗产量实验结果为最高活细胞密度以及单抗产量分别达到了6．810cells／ml和l17rag／1，、关键词：表皮生长因子受体；单克隆抗体；细胞株；筛选中图分类号：Q8l文献标识码：A文章编号：1672-9870(2012)04-0188-04ScreeningofmghExpressionMonodonalAntibodyErCellLineFANLiying，ZHANGYing，2YUYuanhua【1．SchoolofLifeScience，ChangchunUniversityofSc

3、ienceandTechnology，Changchun130022；2．AutekBio，Inc．。Beijing100085)Abstract：ERismonoclonalantibodyoftypeofIgG1，whichismonoclonalchimericantibodycomefromhumanandI／lOUse．ERisoninhibitortoepidermalgrowthfactorreceptor．Investigationsweremadetostudytheprocessoptimiza——tionofCH()cellculture．including

4、cellweaning．screeningcelllineswhichhavehighexpressionofthemonoclonalantibodyERandusingprotein——freemediumtoimprovecellconcentrationandMAbproduction．Theviablecellconcen——tration，andtheMAbproductionreached6．8．10“cells／mland117mg／l，respectively．Keywords：epidermalgrowthfactorreceptor；monoclonalan

5、tibody；cannercell；cellline；screeningEGFR是细胞表面erbB受体家族中的一员，是密度和单抗产量，并以此细胞为模型为动物细胞大一个具有导致酪氨酸激酶活化的细胞受体，主要参规模培养平台技术的建立提供实验基础。与细胞的增殖、生长、迁移、浸润与存活。ER是1材料与方法一种人和鼠的EGFR单克隆抗体的嵌合体，分子量为150Kd。ER是表皮生长因子受体(EGFR)阻止1．1实验材料剂，可以竞争性的抑制EGF及其它配体的结合，阻真核表达载体pSL—ER和CHO细胞(中美奥达断了受体的相关酶的磷酸化，进而抑制细胞生长，公司)诱导调亡，减少基质金属蛋白酶和血管

6、表皮生长因Lipofectamine([nvitrogen公司)子(VEGF)的生成，控制癌细胞的转移，达到抗癌1．2主要试剂目的。目前在我国抗EGFR单克隆抗体的临床胎牛血清(Hyclone公司)、TriplEX(GIBCO公应用还不够广泛，费用也相对较高’。本课题研究司)、DMEM／F12(GIBC()公司)、ATK—M3培养基在哺乳动物中国仓鼠卵巢(CHO)细胞表达系统(中美奥达公司)、G418(Amresco公司)、羊抗人IgG中生产单克隆抗体ER，并期望获得高表达单克隆抗抗体(军科院)、羊抗人IgG—HRP抗体(中杉金桥)、体ER的细胞株。旨在通过上述条件优化提高细胞收

7、稿日期：201203-01作简介：范丽颖(1975一)，女，博士研究生，副教授，主要从事生物制药和天然产物研究，E-mail：fanly@cust．edu．cn第四期范丽颖，等：高表达单克隆抗体ER的细胞株筛选189IgG1(Sigma)。基，轻轻混合(总体积=0．3m1)。弃掉培养基，用lml1．3实验方法]基础培养基清洗细胞2次，加入0．2ml基础培养基。每孔加入0．3ml上步稀释混合液，轻轻混合。CO。培1．3．1转染养箱37℃孵育4-6h，弃液，加入lml生长培养基。1．