罗丹明6G荧光猝灭法测定痕量肝素.pdf

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1、2014年5月分析试验室V01．33No．5第33卷第5期ChineseJournalofAnalysisLaboratory601—603DOI：10．13595／j．cnki．issnl000—0720．2014．0140罗丹明6G荧光猝灭法测定痕量肝素吴雯辉，董存智(淮北师范大学化学与材料科学学院，淮北235000)摘要：在pH8．0的缓冲体系中，肝素使得罗丹明6G的荧光发生明显猝灭，罗丹明6G的荧光猝灭程度在一定范围内与肝素的浓度成正比，据此建立了荧光猝灭法测定痕量肝素的方法，并对体系的荧光猝灭机理进行了讨论。体系的激发波长为482n

2、m，发射波长为560nm，线性范围为0．05—3．0mg／L，检出限为6．1L。方法已应用于肝素钠注射液中肝素含量的测定。关键词：罗丹明6G；肝素；荧光猝灭中图分类号：0657．3文献标识码：A文章编号：1000—0720(2014)05—0601—03肝素为葡糖胺聚糖，是由葡萄糖胺磺酸、葡萄容至10mL，混匀后静置20min。在激发波长为糖醛酸、艾杜糖醛酸组成的多糖链混合物，在水溶482nm，发射波长为560nm，灵敏度为“LOW”的条液中由于其酸性基团的离解而成为带多个负电荷件下测其荧光强度，其中含肝素者的荧光强度为的大阴离子，是蛋白多糖

3、的一种，在人体内由肥大F，试剂空白为，计算△F=Fo—F。细胞分泌而自然存在于血液中，具有广泛的生物学2结果与讨论功能。肝素是目前世界上最有效和临床用量最大2．1荧光光谱的抗凝血药物，临床上主要用于血栓栓塞性疾病、在pH8．0的硼酸一硼砂缓冲溶液中，罗丹明心肌梗死、心血管手术、心脏导管检查、体外循环、6G在482nm和510nm处出现激发峰，实验选择激血液透析等⋯。肝素的检测法有生物方法J、光发波长为482nm，其发射波长为560nm。罗丹明度法、电化学法，、共振散射法、荧光法，6G的荧光光谱如图1所示。由图1可知，肝素的等。本实验发现，肝素

4、可与罗丹明6G发生反应，存在使得罗丹明6G的荧光强度降低，在一定的浓致使罗丹明6G的荧光发生猝灭。在一定浓度范度范围内，罗丹明6G的荧光降低值与肝素的浓度围内，肝素的浓度与罗丹明6G的荧光猝灭程度呈呈线性关系。现线性关系，据此，建立了测定痕量肝素的新方法。1实验部分1．1仪器与试剂FP-6500荧光光度计(日本分光株式会社)。肝素钠溶液：1．0g／L(4℃冰箱内保存)，使用时稀释至0．10g／L。罗丹明6G溶液：1．0×10～mol／L。pH8．0的硼酸一硼砂缓冲溶液。实验用水均为16MQ的高纯水，试剂均为分析纯。1．2实验方法图1荧光光谱图

5、在两支具塞10mL比色管中依次加人pH8．0Fig．tFluorescencespectra的硼酸一硼砂缓冲溶液0．5mL，1．0×10molfL曲线1—3：p(肝素)=0，1，2mg／L；c(罗丹明6G)=5x的罗丹明6G溶液0．5mL，其中1支加入0．10L10～moL／L的肝素钠溶液0．1mL，另1支为试剂空白，用水定收稿日期：2013—11—14E·mail：czdonghb@126．tom分析试验室第33卷2．2酸度的影响求得方法的检出限为6．1g／L。按照实验方法，考察了不同pH下的Tris-HC1，2．7荧光猝灭机理讨论硼酸一硼

6、砂，B．R，巴比妥钠一HC1等缓冲溶液的影引起体系荧光猝灭的原因包括动态猝灭和静响，实验结果表明，硼酸一硼砂缓冲溶液中体系的态猝灭。动态猝灭过程遵循Stern．Volmer方程J：荧光猝灭效果最好。改变硼酸一硼砂缓冲溶液的／F=1+K[Q]=1+K0T0[Q]pH和加人量，实验发现pH为8．0，加入量为恒定温度为20℃，30℃时，测定体系荧光强0．5mL时体系的△F有最大值，因此，实验选择度随肝素浓度([Q])的变化情况，实验结果如图pH8．0硼酸一硼砂缓冲溶液的加入量为0．5mL。2所示。由图2知，F。／F～[Q]曲线呈线性关系，2．3罗丹

7、明6G用量20cI=，30℃下的K值随温度升高而减小改变罗丹明6G的用量，考察罗丹明6G的用(2．804×10L／mol·S和1．614×10量对测定的影响，实验发现，随着罗丹明6G溶液L／mol·S)，且远大于扩散碰撞速率常数2．0×加入量的改变△F先增加后减小，加入量为0．5mL10加L／mol·S～。因此，可认为体系的荧光猝灭时△F有最大值，因此，选择1．0mmol／L罗丹明属于静态猝灭。6G溶液的加入量为0．5mL。2．4反应时间改变反应时间，测定体系△与反应时间的关系，实验结果显示，反应时间在20～180min内体系的△F保持不变。

8、实验选择反应时间为20min。2．5共存物质的影响在实验条件下，考察了不同物质对肝素测定的影响，当肝素质量浓度为1．0mg／L，实验相对误差在±5％以内时，各种物质