激素和硝酸银对芥菜型油菜下胚轴再生植株的影响.pdf

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1、湖南农业大学学报(自然科学版)2014年2月第40卷第1期JournalofHunanAgriculturalUniversity(NaturalSciences)，Feb．2014，4O(1)：1-7DOE10．13331／j．cnki．jhau．2014．01．001投稿网址：http：／／www．hunau．nefqks激素和硝酸银对芥菜型油菜下胚轴再生植株的影响袁玉辉，刘显军，杨柳，陆赢，官春云，刘忠松(湖南农业大学油料作物研究所，湖南长沙410128)摘要：为建立芥菜型油菜高效遗传转化体系，以芥菜型油菜品种‘四川黄籽’的下胚轴为外植体，采用农杆菌介导法进行遗传转化，对愈伤诱

2、导、芽分化及生根培养3个阶段的激素、硝酸银及其配比进行优化处理。结果表明：用含1．0mg／L2,4一D的预培养基诱导愈伤，愈伤再生率达到100％；用含3．0mg／L6-BA+5．0mg／LAgNO3的分化培养基诱导芽再生，芽再生率达28．33％，平均芽丛数为1．73个；在含2．5mg／LIBA+0．05mg／LNAA生根培养基中，不定芽生长11d后开始生根，生根率达到100％；经PCR检测抗卡拉霉素转化苗，阳性率达到23．80％，且GUS染色呈阳性，说明建立的芥菜型油菜遗传转化体系高效可行。关键词：芥菜型油菜；硝酸银；农杆菌介导；下胚轴；激素配比中图分类号：$634．303．53文献

3、标志码：A文章编号：1007—1032(2014)01—0001—07EffectsofhormoneandAgNO3onregenerationofBrassicajunceahypocotylexplantsYUANYu—hui，LIUXian~un“，YANGLiu，LUYing，GUANChun．yun，LIUZhong-song(OilseedResearchInstitute，HunanAgriculturalUniversity,Changsha410128，China)Abstract：HypocotylsofSichuanyellowseedofBrassicaju

4、nceawasusedasexplantstoestablishaneficientgenetictransformationsystembyAgrobacterium—mediatedtransformation．Differentcombinationsofhormoneandsilvernitrateforcallusinduction，buddiferentiationandrootculturewereoptimized．Theresultsshowedthat100％callusregenerationratewasobservedwithpre—culturemediu

5、mcontainingonly1．0mg／Lof2,4一D：shootregenerationratewas28．33％andtheaveragenumberofbudbundleswas1．73whenusingthedifferentiationmediumwith3．0mg／L6-BAand5．0mg／LAgNO3；theshootbeginstorootwith100％rootingmte11daysafterculturingonrootingmediumwith2．5mg／LIBAand0．05mg／LNAA．Thetransformantresistantpositiv

6、eratewas23．80％asdeterminedbyPCRdetectionandGUSstaining，whichillustratedthefeasibilityofthisBiassicajunceagenetictransformationsystem．Keywords：Brassicajuncea；AgNO3；Agrobacterium—mediated；hypocotyls；hormonecombination农杆菌介导的遗传转化具有简单、快速、高效小孢子等_2]。油菜子叶柄和下胚轴外植体具有取材的特点，且整合的外源基因多为单拷贝，转化获得简便、易于再生、生长快速等优

7、点J，因此子叶柄和的单拷贝植株遗传稳定性好，多符合孟德尔遗传定下胚轴是油菜遗传转化的首选外植体。目前，已建律[J1，能直接为遗传育种提供新种质，在植物遗传立了甘蓝型油菜的相对稳定的遗传转化体系，但转化中被广泛应用。油菜遗传转化多采用农杆菌介还没有建立起相对稳定且高效的芥菜型油菜的遗导法，适宜的外植体包括下胚轴、子叶柄、茎段、传转化体系，原因有玻璃化现象严重和转化阳性率收稿臼期：2013_Jo5—14作者詈简昙介：袁玉辉黧(1982一)，湖南株洲1人01，1