猪伪狂犬病病毒载体重组疫苗研究进展.pdf

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1、第36卷第2期中国预防兽医学报Vo1．36．NO．22014年2月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineFeb．2014doi：10．3969~．issn．1008-0589．2014．02．18猪伪狂犬病病毒载体重组疫苗研究进展王林青1,2，郑兰兰一，李坤，陈红英1,3，李文增z，李坤陶z，崔保安(1．河南农业大学牧医工程学院，河南郑州450002；2．郑州师范学院生命科学系，河南郑州4500443．河南省动物性食品安全重点实验室，河南郑州450002)中图分类号：$852．65文献标识码：B文章编号：1008．0589(2014)02．

2、0160．05猪伪狂犬病病毒(Pseudorabiesvirus，PRY)又名猪疱疹1PRV载体的构建病毒I型(SuidherpesvirustypeI)，属于疱疹病毒科(Herpesviridae)甲亚科(Alphaerpesvirinae)水痘病毒属简单高效地将外源基因插入到gD基因位置构建(VadceHovims)，为线状双股DNA病毒，全长约150kb，gDPRV载体的方法只需两步。首先，将单纯疱疹病毒含有77个读码框，平均G+C含量高达73．6％。PRV由(HSV)TK基因插入到TK／gE-双缺失PRV的gD基因位独特的长区段(uL)和短区段(us)及位于US两侧的末端重置，在H

3、AT培养基上可以筛选获得gD／HSV．TK+突变复序列(TR)和内部重复序列(IR)所组成，即形成了株。然后，以目的基因取代HSV．TK基因，gD／gE／TK3UL—IR-US．IR结构。基因缺失株则很容易通过阿昔洛韦筛选而得到分离。插入UL区主要基因有gB、gc、gH、gK、gL、gM、gN、的外源基因可以在体内表达外源蛋白，并能够诱导机体产TK(胸苷激酶)等；us区的基因有gD、、gG、、蛋生抗PRV和外源保护性抗原的抗体，抵抗PRV致死性攻白激酶(PK)基因、l1ku和28ku蛋白基因。病毒增殖的击。这种携带不同保护性抗原基因的PRV载体可以方便必需糖蛋白主要有gB、gD、gH、gL

4、、gK；非必需糖蛋地用来构建多价疫苗【3]。白主要有gc、、gI、gG、gM、gN等，这些在病毒与增强型绿色荧光蛋白(eGFP)作为筛选标记，在重组细胞的相互作用、病毒感染的病理过程和免疫原性中具有PRV构建方面得到广泛应用。表达eGFP的重组PRV特殊作用。TK、gE、gI基因决定PRV的毒力，为重要的gG／M1接种PK．15细胞，在感染早期(6h)则可以观察到毒力因子。TK基因的缺失显著降低病毒毒力，但不影响荧光，随着病毒的增殖(24h～36h)，荧光逐渐增强，直病毒的增殖，是外源基因插入的首选位点⋯。PK基因的至完全病变，荧光淬灭。绿色荧光也可以作为活细胞示踪缺失导致毒力下降，但不影

5、响PRV的免疫效力。除gG实时监测病毒感染的动态分析。eGFP作为报告基因的通在感染细胞过程中大量产生并分泌至培养基中，常存在于用转移载体TK-／gG-／lacZ~、以GFP作为筛选标记的PK和感染细胞分泌物中，其他糖蛋白均为病毒囊膜的成分[2]。gG基因双缺失的疫苗株和稳定表达IacZ基因的PRV目前，以PRV作为活病毒载体构建的基因缺失疫苗株通gE／TK基因缺失突变株的构建均有报道【2]。常为缺失、gI、gG、gc及TK等非必需基因，也有缺将Cre／loxP系统应用于PRV重组研究，在PRV基因失gD或PK基因的报道。PRV已成为重组病毒载体领域组中引入loxP位点，构建含单个loxP

6、位点的PRVTK基的热点之一，具有良好的应用前景。现就以PRV为载体因缺失株，为构建全长的PRV细菌人工染色体(BAC)奠研制重组疫苗的研究进展作以综述。定了基础[4】。苏鑫铭等构建了稳定表达Cre重组酶的293A．Cre细胞系，可以用于含有loxP位点的PRV基因组中快速删除或整合外源基因[5]。利用同源重组在BaghaCorrespOndingauthor收稿日期：2012．11-14基金项目：河南省重大科技专项(111100110300)；河南省科技发展计划项目(132102110175)；郑州师范学院校级课题资助项目(2012079)作者简介：王林青(1978．)，男，河南郑州人，

7、博士研究生，讲师，主要从事动物疫病分子病原学及分子免疫学研究．通信作者：E-mail：baoancui@henau．deu．cn第2期王林青，等．猪伪狂犬病病毒载体重组疫苗研究进展161K61株的TK基因中插入BAC质粒和GFP筛选标记，获2．3猪流感病毒(SIV)／PRV重组疫苗倪建强等构建了得带有BAC质粒的rv。PRVBAC，在细胞培养中重组病毒表达SWHA基因的rPRV．HA，接种细胞后能够稳定表达的增殖速度与亲