WI-03-12检定菌管理规定.doc

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1、恩施金凰新材料有限公司文件编号WI-03-12版号A.0检定菌管理规定页次1/3生效日期2020/01/021．目的制订检定菌管理规定，对从事操作的工作人员进行培训指导，规范操作，确保人员安全操作及检验结果准确无误。2．适用范围本方法适用检定菌的保存和管理。3.职责质检部对本规定的实施负责。4.内容4.1检定菌的购买与接收4.1.1检定菌的购买：根据检验需要，由检验员填写购物申请单，注明：检定菌名称、编号、购买数量、用途等，审核批准后，到省或市药检所购买。4.1.2检定菌的接收：检验员核对检定菌名称、编号、数量、形态特征准

2、确无误后方可接收。检定菌接收后，在容器外贴上标签（标签格式如下框1）：检定菌名称检定菌编号传代次数接种人传代日期检定菌名称检定菌编号购买人购买日期接收人接收日期（框1）（框2）4.1.3购买后，置冰箱（2～8℃）中保存。4.1.4填写“检定菌接收记录”4.2检定菌的保存4.2.1检定菌由专人负责保管，保管员应受过专业培训，有一定的菌种保存经验。4.2.2检定菌需定期进行接种传代，芽孢杆菌传代周期为3～6个月，其它菌种为1个月。4.2.3传代的方法：核对检定菌名称、编号、传代次数（5次以内）、传代日期、传代用培养基斜面准确无

3、误后，按无菌操作要求，将菌种的典型菌落接种到琼脂培养基斜面上（特殊菌种可用液体培养基）并在容器上贴上标签（标签格式如框2）：4.2.4每天检查冰箱的温度并作适当的调整，使温度维持在2～8℃，每周检查一次菌种管的棉塞或胶塞是否松动、是否发霉、是否有杂菌生长及菌种的形态特征、干燥状态。并填写“检定菌定期检查记录”。发现异常，应及时处理。4.2.5菌种传代次数应控制在5代内，超过5代或经检查不合格的应进行煮沸或高压蒸汽灭菌，然后废弃。并及时填写“检定菌的销毁记录”。恩施金凰新材料有限公司文件编号WI-03-12版号A.0检定菌管

4、理规定页次2/3生效日期2020/01/024.3试验中阳性对照菌的选择4.3.1应根据供试品特性选择阳性对照菌：a.无抑菌作用及抗革兰阳性菌为主的供试品:以金黄色葡萄球菌为对照菌；b.抗革兰阴性菌为主的供试品以大肠埃希菌为对照菌；c.抗厌氧菌的供试品，以生孢梭菌为对照菌；d.抗霉菌的供试品，以白色念珠菌为对照菌。4.3.2加菌量小于l00cfu，供试品用量同供试品每份培养基接种的样品量。阳性对照管培养48～72小时应生长良好．4.4生物试验中需用到的检定菌：菌种名称编号使用目的使用频率金黄色葡萄球菌CMCC(B)2600

5、3产品无菌试验阳性对照常用培养基灵敏度检查、培养基适用性检查需要时用白色念珠菌CMCC(F)98001培养基灵敏度检查、培养基适用性检查需要时用大肠埃希菌CMCC(B)44102生活饮用水大肠菌群检测阳性对照培养基适用性检查需要时用铜绿假单胞菌CMCC(B)10104培养基灵敏度检查、培养基适用性检查需要时用枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501培养基灵敏度检查、培养基适用性检查需要时用生孢梭菌CMCC(B)64941培养基灵敏度检查、培养基适用性检查需要时用黑曲霉菌CMCC(F)98003培养基灵敏度检查、培养基适用性检查

6、需要时用备注：其它需用到检定菌种的情况，具体参见相应引用标准。4.5检定菌悬液的制备4.5.1检定菌接种传代后应制备成菌悬液以方便取用.4.5.2菌液制备：4.5.2.1金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌菌悬液的制备：a.接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24小时；b.接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基上，23～28℃培养24～48小时;上述培养

7、物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数50～100cfu（菌落形成单位）的菌悬液；恩施金凰新材料有限公司文件编号WI-03-12版号A.0检定菌管理规定页次3/3生效日期2020/01/024.5.2.2黑曲霉孢子悬液的制备：接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数

8、50～100cfu的孢子悬液。4.5.2菌液制备后，在容器上贴上配制标签，填写“检定菌悬液制备记录”。4.5.3菌液制备后，若在常温下放置，应在2小时内使用；若保存在2～8℃，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的存储期内使用。5.记录保存：品管部保管5年。6.相关记录6.1检定