真核生物基因组总DNA的提取与鉴定课件.ppt

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1、基因组DNA的分离与纯化一、酚抽提法的原理以含EDTA、SDS的裂解液裂解细胞，经蛋白酶K消化后，用PH8.0的Tris饱和酚抽提蛋白质，离心后取上层水相，无水乙醇沉淀DNA。二、技术路线破膜提纯沉淀、洗涤细胞膜碎片，细胞器，脂、蛋白质，DNA，RNA去除脂、蛋白质浓缩DNA、去盐杂质真核生物基因组DNA的提取（一）1.低渗去除红细胞2.裂解白细胞真核生物基因组DNA的提取（二）3.酚抽提4.无水乙醇沉淀500μl真核生物基因组DNA的提取（三）5.DNA沉淀的洗涤与干燥6.DNA溶解与电泳鉴定三

2、结果琼脂糖凝胶电泳鉴定EB与DNA的结合EB可嵌入到碱基平面，使核酸在UV激发下发出桔红色荧光。三结果琼脂糖凝胶电泳鉴定TheEnd裂解液的作用裂解液EDTASDS乙二胺四乙酸(络合物)二价金属螯合剂，抑制DNA酶十二烷基磺酸钠（去污剂）使细胞膜破裂；将核酸释放出来；使蛋白质变性Tris-HCl缓冲夜，维持稳定的pH值（8.0）DNA酚抽提法示意图酚的作用酚可以使蛋白质变性沉淀、抑制DNA酶活性。PH8.0的Tris溶液可以使抽提出的DNA进入水相。DNA酚抽提法示意图蛋白酶K的作用水解组蛋白，促

3、进DNA与组蛋白的分开。DNA的沉淀无水乙醇沉淀沉淀前往往加入NaAc等盐离子，作用是中和核酸分子表面的负电荷，有助于分子之间的聚集。无水乙醇可以吸收分子之间的水，使DNA沉淀析出，无水乙醇使用前冰冻，可以减少DNA沉淀析出过程释放热量对DNA的损伤。TE10mmol/LTris-HCl1mmol/LEDTA上样缓冲溶液（6×或10×）溴酚蓝（电泳指示剂，约相当于300bpDNA）二甲苯氰（电泳指示剂，约相当于4000bpDNA）甘油/蔗糖（增加DNA溶液的密度）0.5~1.4%琼脂糖凝胶水相的吸

4、取SDS（去垢剂）