抗新城疫病毒中药活性组分筛选的研究.pdf

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1、分类号：墨昼墨至：圣密级：公珏单位代码：学号：100862008450抗新城疫病毒中药活性组分筛选的研究ScreeningtheActiveComponentsinTraditionalChineseMedicineforAnti．．NewcastleDiseaseVirus学位申请人：霍晓青指导教师：董世山教授学科专业：基础兽医学学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二。一一年五月二十七日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，

2、除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑j量壅些态堂或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：魂嘲签字眺伽Ⅵ年／月∥日关于论文使用授权的说明本学位论文作者完全了解塑j匕壅些太堂有关保留及使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门(机构)送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查(借)阅。本人授权逦j量壅些太堂可以将论文的全部或部分内容编入有关数据

3、库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等方法加以保存或编成学位论文。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)学位论文作者签名：傀％香签字日期：9,oIf年钿fEl导师签名：签字日期：摘要本研究探寻了中药抗新城疫病毒的有效组分，为开发新型、有效、环保的中药抗病毒药物奠定基础。试验方法：收集治疗畜禽病毒病的中药处方，将出现频率高的4种抗病毒中草药(黄芪、黄芩、黄连、大青叶)作为提取有效组分的试验材料。将中药粉碎后用乙酸乙酯和乙醇浸提，提取物作为醇提物，将每种中药的醇提物浓缩干燥后经过硅胶层析柱分离后，收

4、集20种不同极性的洗脱组分，再次浓缩干燥，作为抗病毒所需筛选的药物。利用Marcl45细胞建立抗新城疫病毒的细胞筛选模型，设立预防组、治疗组、自愈组和空白对照组。预防组：细胞培养20h后更换含适量预防药物的维持液，继续培养8h后感染新城疫病毒，再培养22h后利用MTT染色法测定结果；治疗组：细胞培养28h后与预防组、自愈组同时感染新城疫病毒，继续培养8h后更换含治疗药物的细胞培养液，再培养14h后测定结果：自愈组：在细胞培养28h后感染病毒，用维持液代替用药处理；空白对照组：用维持液代替病毒感染

5、和用药处理。观察细胞病变及死亡状况，利用MTT染色法测定结果。MTT染色法能定量检测细胞的增殖活性，来间接反应药物的抗病毒效果。为此我们将MTT作为细胞培养物中病毒增殖情况的指示系统。试验结果如下：1．中药活性组分的提取：使用200-300目的硅胶进行硅胶柱层析，成功从黄芪、黄芩、黄连、大青叶的醇提物中分离出共80种不同极性的组分。2．建立抗病毒模型：利用Marel45细胞感染新城疫病毒，感染后22h出现明显的细胞病变，建立了抗病毒药物筛选模型。3．活性组分的抗病毒效果：黄芪提取物中预防组有4种

6、组分对病毒具有抑制作用，OD值均与接毒对照组差异极显著(P<0．01)。治疗组中有5种组分抑制效果明显，且OD值均与接毒对照组差异极显著(P<0．01)，表明黄芪的醇提取物中有些组分有显著抗病毒作用。黄芩提取物中预防组有5种组分对病毒具有抑制作用，其中16号组分OD值与接毒对照组差异显著(P<0．05)，其它4种组分OD值与接毒对照组差异极显著(P<0．01)。治疗组中7号组分OD值与接毒对照组差异显著，其他5种组分抑制效果更明显，OD值与接毒对照差异极显著(P

7、有些组分有显著的抗病毒作用。黄连醇提取物中预防组有4种组分对病毒具有抑制作用，其OD值与接毒对照组差异极显著(P

8、Marel45细胞所建立的筛选模型能够有效筛选出中药的抗病毒有效组分，利用活性组分筛选模型分别从黄芪、黄芩、黄连、大青叶等中药醇提取物中筛选出多种具有明显抗病毒作用的活性组分。关键词：新城疫病毒；Marcl45细胞；中药；抗病毒；筛选模型；活性组分一ScreeningtheactivecomponentsintraditionalChinesemedicineforAnti-NewcastlediseasevirusMasterCandidate：HUOXiaoqingSpecialty：Bas