黄瓜棒孢叶斑病的Dot-ELISA检测技术研究-论文.pdf

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1、扛物保2013，39(6)：69—73黄瓜棒孢叶斑病的Dot-~A检测技术研究高苇，李宝聚，刘春艳，王勇，石延霞(1．天津市植物保护研究所，天津300381；2．中国农业科学院蔬菜花卉研究所，北京100081)摘要以多主棒孢的可溶性蛋白为抗原，免疫家兔获得特异性强、灵敏度高的多克隆抗体。通过优化Dot—ELISA反应条件，建立了黄瓜棒孢叶斑病的Dot—ELISA检测方法，该方法田间诊断准确率高，操作简单，整个检测过程仅需5h左右。通过同多主棒孢在黄瓜叶片上不同侵染时期的症状及显微诊断比较，发现该方法可在黄瓜棒孢叶斑病潜伏、未显症期对病害进行早期诊断，为黄瓜栽培期的病害监测

2、和及时防控奠定基础。关键词棒孢叶斑病；黄瓜；多主棒孢；Dot-ELISA；早期诊断中图分类号：S436．421．1文献标识码：ADOI：10．3969／j．issn．0529—1542．2013．06．013StudyonrapiddetectionofCorynesporaleafspot0ncucumberplantsGaoWei，LiBaoju，LiuChunyan，WangYong，ShiYanxia(1．inInstituteofPlantProtection，in300381；2．InstituteofVegetablesandFlowers，ChineseA

3、cademyofAgriculturalSciences，Beqi~100081，China)AbstractApolyclonalantibodywithstrongspecificityandsensitivityagainstsolubleproteinofCorynesporacassi—icola(Berk&M．A．Curtis)C．T．Weiwasproducedinrabbits．TheprocedureofDot—ELISAwasestablishedandop—timized．Dot—ELISAcouldbeeffectivetoidentifythep

4、athogenininfectedhosttissuespriortotheonsetofvisualsymptomsinfieldsanddistinguishedfromotherpathogensoncucumberplants．Thismethodhasgoodpracticabili—tyanddistinctiveeffectontheearlydiagnosisofCorynesporaleafspotoncucumberplantsinfields．KeywordsCorynesporaleafspot；cucumberplant；Corynesporac

5、assiicola；Dot-ELISA；earlydiagnosis多主棒孢[Corynesporacassiicola(Berk&M．NCM)为载体的斑点酶联免疫技术(Dot—ELISA)，A．Curtis)C．T．Wei]是一种重要的植物病原真可以通过简单的颜色反应对被测抗原和抗体进行定菌，主要侵染寄主植物的叶片，同时也可危害茎、性分析，并且具有试剂用量少、吸附量大、反应快速，花和果实，造成落叶、落果等现象[1]。近年来，操作简单的优点，更适用于田问检测_6]。本研究以由多主棒孢引起的黄瓜棒孢叶斑病在我国_3]、日Dot—ELISA技术为基础，以黄瓜棒孢叶斑病病原菌本

6、l4及韩国[53等亚洲国家大面积暴发，造成巨大体可溶蛋白为抗原，建立一种准确、快捷、简单的病的经济损失。在田问不同的温湿度等条件下，黄原菌检测技术，为黄瓜棒孢叶斑病田间检测及诊断瓜棒孢叶斑病具有小型斑、大型斑及角状斑3种试剂盒的研发提供技术基础。典型的症状，极易与霜霉病、角斑病等叶部病害1材料与方法相混淆L3]。目前，我国基层植物真菌病害的诊断主要依靠病斑症状，仅少数科研单位掌握病原菌1．1供试菌株的显微特征，因而常常发生由于病害误诊而造成本研究包括8株供试菌株，其寄主和采集地见的巨大经济损失。表1。所有菌株均保存于中国农业科学院蔬菜花卉以硝酸纤维素膜(nitrocell

7、ulosemembrane，研究所菜病综防组。收稿日期：2013一O1—17修订日期：2013—02—2l基金项目：大宗蔬菜产业技术体系建设专项(CARs一25)*通信作者E-mail：libj@mail．caas．net．cn·70·艋物保20131．2多主棒孢菌体可溶蛋白的提取0．5、1．0、1．5、2．O、2。5h5个处理；将AP标记的羊将多主棒孢SD21在PD培养基中，振荡培养抗兔IgG稀释1。0～1500倍后分别加入已包被的7d。收集菌丝体，PBS缓冲液反复冲洗，然后孔中，将酶标二抗以最佳工作浓度在37℃下设0．5、