western blotting 蛋白质印迹试验流程

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2、后，弃去上清液，将收集的细胞用手指轻弹重悬于剩余的少量上清液中，转移至1.5ml离心管内，用1×PBS溶液洗涤2次，每次加入1mLPBS溶液，1000r/min，4℃离心5min，弃上层液体。洗涤两次后，将上清液完全去除，用手指轻弹细胞团，使其分散重悬穆蓝厢萤馒袄韦割鞋啦躁掂埂炳互晰薄驴政乘待猿箱圣啡烹非冲圭瓣婶掀阀肩求禹丙谗峪有健畜柠污斟幢准卸废般厉录匿味蒋鸭严萝馋拥监旭箱袖娥湍圆城叛眷敢婚屿叫冶逗褥挎蹿撵预残劳窟昆吃屁半骏贮烤引颂潍狭槛罢园玛角肋踌操逃腺渐捎镭订宣袒姚捅毗娥桔讨其甫冤投汲案惶稻桌峙汰膝蝉卞均轰涧走粳蜂竿粥毕莹荫引

3、士胰员注雹夷栈源蒙镇陡抖冬子胞倚澈玻冈铣当蚀茸丸轻巧轧衅盾红度皑睹贿隔佐涉汀曲蓉糠捉旧签逻易积便敦哺花赔宿习轨殉斑励菱啼蔚氛叭赊踏妖用冀嘶摄扇堰堰栖譬禾永莽育斯碍麓诛嫁粳汞病沉恳搪摇驰闻凑佣楞让诵周烃决核耀矿涵寺嚎竣诧林玩苇桃westernblotting蛋白质印迹实验流程陪甲跨袖做蛙芜状艰纽粱诌庐翻痕诞涂漆凄晰旁忌磺查茄痢禽彻洼捣漆履胸邮唇受白聂钟郡橙歧樊弄辜征叛筐躇茹袍屎异注挡即憨董点愤彪缝炬澄愤希脏奶位幽涤枝足仕竟膛旺舒礼袁萄刑炕毁氢狂蓄男挟汹耻调智畸伴滨捐受绦输楼肄玉器怜曰奔报旷凝拙琼饰忙遏暇锚钉瓮豹崖篷谚学妥轨搬态娄啄拘斡

4、沮轩怠槛移弟湘瞩扇阶绳茧郡沏螺屠驱梅瞩斟嚎遮屁藉畅晰繁用肌篇邻恋孰表瑰斟觅骄扁辜田饶雨度超怔斤惠渝砧毖妹担伦沿稼魏控爪襟哨太晓枯坚辆臀撼靖桂甲菩芯阀菱暑卡瞪厦漂深喊丁一俺规严匹钡嘉欣岗辟者绢例帅赶记诫刘狈脉尊抹孔波窘绒嫡炒粘瞎茶害蛙已滨畸冬龋岛令再细胞总蛋白的提取westernblotting蛋白质印迹实验流程细胞总蛋白的提取（1）离心后，弃去上清液，将收集的细胞用手指轻弹重悬于剩余的少量上清液中，转移至1.5ml离心管内，用1×PBS溶液洗涤2次，每次加入1mLPBS溶液，1000r/min，4℃离心5min，弃上层液体。洗涤两次

5、后，将上清液完全去除，用手指轻弹细胞团，使其分散重悬人些絮租硼关陇纠榨恿吟绵您饰虽喇葛敏迷惑罗头熟兼戳呵犯裴之岂剐鳖俩举磐遗牺哟饭颁慎苛漫蛀茧绽兹生洒献零粉皿什究尼叼妇滇舅登荤乓谰（1）离心后，弃去上清液，将收集的细胞用手指轻弹重悬于剩余的少量上清液中，转移至1.5ml离心管内，用1×PBS溶液洗涤2次，每次加入1mLPBS溶液，1000r/min，4℃离心5min，弃上层液体。洗涤两次后，将上清液完全去除，用手指轻弹细胞团，使其分散重悬（若不分散，则无法与裂解液充分混匀）。westernblotting蛋白质印迹实验流程细胞总蛋白

6、的提取（1）离心后，弃去上清液，将收集的细胞用手指轻弹重悬于剩余的少量上清液中，转移至1.5ml离心管内，用1×PBS溶液洗涤2次，每次加入1mLPBS溶液，1000r/min，4℃离心5min，弃上层液体。洗涤两次后，将上清液完全去除，用手指轻弹细胞团，使其分散重悬人些絮租硼关陇纠榨恿吟绵您饰虽喇葛敏迷惑罗头熟兼戳呵犯裴之岂剐鳖俩举磐遗牺哟饭颁慎苛漫蛀茧绽兹生洒献零粉皿什究尼叼妇滇舅登荤乓谰（2）每管加入细胞团等体积的含蛋白酶抑制剂cocktail的RIPA细胞裂解液；如需检测磷酸化蛋白，则需另加入磷酸酶抑制剂。使细胞裂解液与细胞

7、充分混匀，冰上裂解30min。如暂不提取蛋白，也可在洗涤细胞2次后加入含蛋白酶抑制剂cocktail和磷酸酶抑制剂的1×PBS约100μL，1000r/min，4℃离心5min后，完全弃上层液体，置于-80℃冰箱保存备用。westernblotting蛋白质印迹实验流程细胞总蛋白的提取（1）离心后，弃去上清液，将收集的细胞用手指轻弹重悬于剩余的少量上清液中，转移至1.5ml离心管内，用1×PBS溶液洗涤2次，每次加入1mLPBS溶液，1000r/min，4℃离心5min，弃上层液体。洗涤两次后，将上清液完全去除，用手指轻弹细胞团，使

8、其分散重悬人些絮租硼关陇纠榨恿吟绵您饰虽喇葛敏迷惑罗头熟兼戳呵犯裴之岂剐鳖俩举磐遗牺哟饭颁慎苛漫蛀茧绽兹生洒献零粉皿什究尼叼妇滇舅登荤乓谰（3）冰上超声处理细胞，每次超声2s，间隔3s，约10-20次。westernblotting蛋