RT-CIM自动化实时检测细胞迁移和侵润ppt课件.ppt

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1、AutomatedandReal-timeCellMigrationandCellInvasionAssayUsingtheRT-CIMTMSystem——使用RT-CIMTM系统自动化实时检测细胞迁移和侵润实验目录NO.1简介NO.2材料和方法NO.3应用NO.4总结NO.1简介RT-CIM™系统是用于检测细胞侵润和迁移的新型实时细胞分析系统。16孔RT-CIM™系统主要由4部分组成：1.W200微电子细胞分析仪2.16孔RT-CIM™工作台3.计算机（预装SP软件）4.16孔RT-CIM™检测板RT-CIM™检测板由上室板和下室板组成。上室板中的16个孔的底

2、部具微孔膜，其下表面整合了微电子生物传感器。下室板则作为细胞培养基的容器。当上室板中的细胞通过微孔发生迁移时就可被生物传感器检测到。通过RT-CIM™系统测量的阻抗得到的指数，反映了迁移细胞的数量。在SP软件的控制下，微电子细胞分析仪连接16孔RT-CIM™工作台，自动选择16孔RT-CIM™检测板上的每个生物传感器进行测试，并把测试数据传输给软件。SP软件根据此数据得到细胞指数，并绘制曲线。RT-CIM™系统的优点：1.对16孔一次测试时间小于10s2.可灵活的配置16-96个测试孔3.系统高可靠性4.可根据需求灵活制定实验流程5.强大的数据分析能力NO.2材料

3、和方法迁移和侵润使用RT-CIM。迁移实验和趋触性实验中一般情况下，首先，细胞血清饥饿4小时，然后用胰蛋白酶消化细胞，停止旋转，并悬浮在显示细胞密度是“0.2％牛血清白蛋白”的无血清培养基中。在此之前电镀细胞，制备涂布膜。为制备胞外外基质涂层，将稀释适当浓度的ECM并将其添加到在膜的两侧进行迁移实验和传感器侧,仅用于30分钟-1小时的趋触性实验。控制膜涂以SFM或牛血清白蛋白PBS/0.2％。涂布后，用PBS洗涤膜，并用PBS/0.2％牛血清白蛋白封阻15-30分钟。底部室都充满了牛血清白蛋白SFM/0.2％及趋化因子为完成迁移实验或完成介质趋触性实验。设备组装和

4、细胞补充至顶端室,然后进行细胞迁移监控。对于侵润实验，所用试剂和细胞处理类似于迁移实验中所描述的方法和其它的涂层。定量迁移。经过几个小时的迁移或侵润，装置确定RTCIM位置站和最后一个细胞指数。此外，对于手动计数，设备会被分解,顶部室会被浸入的PBS洗涤。经染色后，膜顶部的细胞被轻轻擦拭除去并对膜底部一侧细胞的进行定量。定量用显微镜为4个单独栏的每个样品计数。RT-CIM迁移设备的示意图A）的横截面组装设备描绘上下腔。B）底部（膜侧）上腔显示装有金制的微型传感器。C-D）组件的上部和下部腔室的RT-CIM用的螺栓和螺丝。E）RT-CIM站是为了RT-CIM迁移的设

5、备置于恒温箱。NO.3应用3.1代表性的细胞株和原代细胞迁移的评定：为监视迁移的侵润性细胞系MDA-MB-231和HT1080，原代细胞，人脐静脉内皮细胞和非侵润性的细胞系，顶部室中加入NIH-3T3，2和4X104细胞,底室培养基填充5％血清作为趋化因子。迁移过程每两分钟检测一次，总计超过14小时。所选择的终止点是这些细胞系的倍增时间小于消除细胞增殖时。当它通过并在膜的底面落户时，膜的集成传感器可直接连续监测底侧上的顶部室的细胞。加入细胞后，观察每个细胞系迁移的特征模式。在第一个2-4小时观察到HT1080，NIH-3T3，和人脐静脉内皮细胞的细胞指数快速增加。

6、这通过陡峭的趋化梯度反映了存在多数移动的细胞。随着时间的推移细胞指数增加减慢。这时梯度变浅，较少的细胞迁移。与此相反，随着时间的推移迁移，MDA-MB-231细胞显示出相比其它细胞系更加持久的增长。对于所有细胞系研究RT-CIM能够测量镀层细胞密度的数量上的高低差异。代表细胞株和原细胞迁移实时定量测量A）2和4x104细胞、人脐静脉内皮细胞和MDA-MB-231B）HT1080和NIH-3T3细胞的顶端超过14小时监控室和迁移。3.2细胞迁移的定量RT-CIM系统对RT-CIM技术的重要特征之一是允许进行简单的定量分析细胞迁移。对于统计评估的质量测量，添加不同密度

7、的HT1080和COS7细胞到顶腔的电子室，对迁移实验进行定量RT-CIM计数和手动细胞计数。类似早期观察到的HT1080迁移模式，前几个小时可观察到细胞指数快速增长，接着细胞指数增加较慢。随着时间的推移镀层细胞密度相对细胞指数计量按比例增加。要确定相关迁移定量RT-CIM与更传统的定量方法，如细胞计数，迁移电子室细胞指数值经过14个小时的细胞迁移手工计数，与电镀细胞数成反比。结果表明：细胞计数和细胞指数值与镀层细胞密度密切相关，并通过一定范围内的细胞密度，定量迁移细胞的类似的变化趋势和相对差异。此外，演示和统计学评估这些量化的电镀技术和细胞数之间的关系，测得的迁

8、移细胞用R