miR-181a-5p在胎盘滋养层细胞侵润和迁移中的作用机制研究

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1、学校代码10459学号或申请号201622444023996密级公开专业硕士学位论文miR-181a-5p在胎盘滋养层细胞侵润和迁移中的作用机制研究作者姓名：王蕊导师姓名：孙莹璞教授吴亮博士专业名称：妇产科学（生殖医学）培养院系：郑州大学第一附属医院完成时间：2018年5月AdissertationsubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterThefunctionalmechanismofmiR-181a-5pininvasionandmigrationofplacentaltrophoblas

2、tcellsByRuiWangSupervisor:Prof.YingpuSunPh.DLiangWuObstetricsandGynecology（Reproductivemedicine）TheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityMay，2018miR-181a-5p在胎盘滋养层细胞侵润和迁移中的作用机制研究硕士研究生：王蕊导师：孙莹璞教授吴亮博士郑州大学第一附属医院生殖医学中心中国郑州450052摘要背景滋养层细胞分化异常可导致滋养层细胞侵润和迁移异常，引发子痫前期（Pre-eclampsia

3、,PE）等妊娠相关疾病。子痫前期是一种妊娠期特有的多器官多系统受影响的高血压综合征,多于妊娠20周后出现，并以高血压、蛋白尿等症状为主要表现,世界范围内的发病率约为3%~5%,是孕产妇及新生儿死亡的重要原因之一。微小RNA(miRNA,MicroRNA)是一类调节基因转录后表达的短链非编码小分子。在妊娠期间，miRNA参与一系列的反应，包括胚胎植入前的子宫内膜准备，与免疫反应相关的基因重组，胎盘发育和血管生成等过程，并且长期以来一直被认为与胎盘发育异常和妊娠并发症息息相关。研究表明，多种miRNA在胎盘中大量表达，且miRNA在胎盘中的异常表达可能是

4、引发子痫前期的病因之一。但目前仍需深入研究miRNA对胎盘发育的影响及其具体作用机制。在前期实验研究中，已发现miR-181a-5p是一种在重度子痫前期患者的血浆和胎盘中表达均上调的miRNA。本课题着重研究了miR-181a-5p在胎盘滋养层细胞侵润和迁移中的作用及分子机制，从而深入了解重度子痫前期的发病机制。I目的通过本课题，阐明miRNA-181a-5p在胎盘滋养层细胞侵润及迁移中的作用及其潜在分子机制，以期深入了解miRNA在胎盘发育及子痫前期发生发展中的作用。材料和方法1.根据纳入及排除标准（参照第八版《妇产科学》）收取胎盘组织样品，均匀取

5、样清洗后，直接液氮冻存备用。2.通过使用四个免费数据库（包括TargetScan7.0，PITA，PicTar和miRanda）预测miR-181a-5p直接作用的靶基因，将IGF2BP2作为待选的miR-181a-5p直接底物并进行后续实验设计。3.在重度子痫前期产妇胎盘中，采用RT-qPCR技术检测miRNA-181a-5p表达水平；采用WesternBlot技术检测IGF2BP2蛋白的表达。4.采用Transwell细胞侵润迁移实验研究miR-181a-5p对HTR-8/SVneo细胞的侵润和迁移的作用。5.构建荧光素酶载体后，将其与miR-1

6、81a-5p模拟物或抑制剂共转染后，通过双荧光素酶测定实验检测荧光素酶报告基因活性，并通过RT-qPCR和WesternBlot技术检测了miR-181a-5p在HTR-8/SVneo细胞中对IGF2BP2mRNA和蛋白质水平的影响，从而验证miR-181a-5p是否直接抑制IGF2BP2。6.采用Transwell细胞侵润迁移实验探究过表达或抑制IGF2BP2时，其对HTR-8/SVneo细胞侵润和迁移能力的影响。7.在转染miR-181a-5p的HTR-8/SVneo细胞中共转染IGF2BP2基因的过表达质粒，采用Transwell细胞侵润迁移实

7、验检测侵润迁移能力的变化和WesternBlot技术检测IGF2BP2表达量改变，从而探究miR-181a-5p对滋养层细胞侵润和迁移的抑制作用是否通过直接抑制IGF2BP2实现。结果1.在重度子痫前期产妇胎盘中，miRNA-181a-5p表达显著上调，IGF2BP2蛋白表达量显著下调。2.miR-181a-5p抑制HTR-8/SVneo细胞的侵润和迁移，而IGF2BP2促进IIHTR-8/SVneo细胞的侵润和迁移。3.miR-181a-5p直接抑制IGF2BP2。4.miR-181a-5p通过IGF2BP2mRNA3’-UTR上的保守结合位点对I

8、GF2BP2产生抑制作用。5.miR-181a-5p通过直接降调IGF2BP2抑制滋养层细胞的侵润和迁移。结