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时间：2020-11-25
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1、荧光原位杂交实验18三、实验用具及材料Y染色体探针、人外周血中期染色体细胞标本、恒温水浴锅、培养箱、染色缸、载玻片、NikonE-400、荧光显微镜、盖玻片、封口膜、200μL移液器、20μL移液器、暗盒、指甲油、甲酰胺、氯化钠、柠檬酸钠、氢氧化钠、吐温20。四、实验方法及步骤1.探针及标本的变性探针变性：标本变性：2.杂交DNA探针10µL滴于已变性并脱水的玻片标本上，盖上18×18盖玻片，用Parafilm封片，置于潮湿暗盒中37℃杂交过夜（约15～17h）。3.洗脱4.杂交信号的放大5.封片可采用不同类型的封片液。如果封片液
2、中不含有Mowiol（可使封片液产生自封闭作用），为防止盖片与载片之间的溶液挥发，可使用指甲油将盖片周围封闭。封好的玻片标本可以在-20～-70的冰箱中的暗盒中保持数月之久。6.荧光显微镜观察FISH结果先在可见光源下找到具有细胞分裂相的视野，然后打开荧光激发光源，FITC的激发波长为490nm。细胞被PI染成红色，而经FITC标记的探针所在的位置发出绿色荧光。本实验使用的是Y染色体上的特异序列，因此在男性外周血染色体标本的杂交中呈阳性，即使在未分裂的细胞中，也可以观察到明显的杂交信号。照相记录实验结果。观察结果(a)间期细胞(b
3、)中期细胞，Y染色体荧光标记探针五、作业及思考题1.通过实验总结荧光原位杂交实验的技术关键。2.实验中会不会出现假阳性，为什么？此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！ 感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢
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