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《连翘归尾煎抗乳腺癌药效及其连翘归尾颗粒制备工艺和质量标准研究.docx》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、连翘归尾煎抗乳腺癌药效及其连翘归尾颗粒制备工艺和质量标准研究目的本实验以对人乳腺癌MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞增值的抑制作用为指导,以有效成分转移率为指标,优选连翘归尾煎最佳提取溶媒;通过体外细胞水平实验,研究连翘归尾煎对人乳腺癌MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用以及对细胞迁移、凋亡、周期的影响,考察连翘归尾煎抗乳腺癌药效作用;确定连翘归尾煎的提取工艺和成型工艺;建立连翘归尾颗粒的质量标准。方法1.本实验分别设立0%,5%,20%,35%,50%,65%,80%,95%乙醇8个浓度,以对人乳腺癌MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞增值的抑制作用为指导,
2、优选连翘归尾煎最佳的提取溶媒;通过HPLC法测定连翘归尾煎不同乙醇浓度提取物中有效成分的含量,加权计算有效成分总的转移率,确定最佳的提取溶媒。2.将连翘归尾煎乙醇提取物稀释成不同的药物浓度,设立空白组、阴性对照组、阳性对照组、加药组,测定药物作用24h、48h、72h后,不同给药浓度连翘归尾煎乙醇提取物对乳腺癌细胞增值的抑制作用,求出IC50;通过细胞划痕实验研究连翘归尾煎乙醇提取物对细胞迁移能力的影响;采用AnnexinV/PI双染色法检测连翘归尾煎乙醇提取物对细胞凋亡的影响;PI单染色法检测连翘归尾煎乙醇提取物对细胞周期的影响。3.以连翘归尾煎的出膏率和有效成分
3、的转移率为指标,采用正交试验,研究溶媒量（8倍、10倍、12倍）、煎煮时间（1h、2h、3h）、煎煮次数（1次、2次、3次）、浸泡时间（15min、30min、45min）四因素对连翘归尾煎出膏率和有效成分含量的影响,确定最优的提取工艺;以堆密度、休止角、吸湿性、临界相对湿度等为指标,考察辅料乳糖、糊精、糖粉、淀粉不同配比以及不同乙醇浓度对连翘归尾颗粒成型工艺的影响。4.对连翘归尾颗粒进行性状鉴别,采用薄层色谱法,以对照药材或对照品为对照对颗粒剂中的各单味药进行薄层色谱鉴别;根据颗粒剂的相关规定,对连翘归尾颗粒进行粒度、水分、溶化性、砷盐和重金属等检查;采用HPLC法,建立连翘归尾颗粒中
4、连翘苷、连翘酯苷、绿原酸等多指标成分的含量测定方法。结果1.体外细胞增值抑制实验和有效成分转移率的测定结果,8个乙醇提取浓度中,综合效果最好的是20%乙醇提取物。在作用24h、48h、72h后,20%乙醇提取物对于MDA-MB-231细胞增值抑制率分别为65.05%、78.03%、87.84%,对于MCF-7细胞增值抑制率分别为70.61%、73.92%、75.20%,有效成分的转移率为46.25%。2.连翘归尾煎乙醇提物对乳腺癌细胞体外药效实验研究（1）实验发现连翘归尾煎乙醇提取物对人乳腺癌MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞的抑制作用随作用时间越长,抑制作用越大,药物浓度越大,抑
5、制作用越大,通过计算,作用时间24h、48h、72h后,MDA-MB-231细胞IC50分别为0.7959mg/mL、0.6989mg/mL、0.5107mg/mL,MCF-7的IC50分别为0.5642mg/mL、0.5576mg/mL、0.5335mg/mL,IC50浓度随着作用时间的增长变小,P<0.05,数据具有统计学意义。（2）对于MDA-MB-231细胞,细胞的迁移率为67.26%,加药后,低剂量组、中剂量组、高剂量组细胞的迁移率分别为15.96%、14.47%、6.78%,对于MCF-7细胞,细胞的迁移
6、率为36.73%,加药后,低剂量组、中剂量组、高剂量组细胞的迁移率分别为8.56%、3.66%、-1.65%,说明连翘归尾煎会影响细胞的迁移能力,药物浓度越大,影响能力越大,P<0.05,数据有统计学意义。（3）对于MDA-MB-231细胞,连翘归尾煎浓度分别为0.5mg/mL、0.7mg/mL、0.9mg/mL,作用12h,凋亡率分别为10.88%、16.85%、17.92%,作用24h,凋亡率分别为13.08%、17.9%、28.51%,作用48h,凋亡率分别为31.16%、35.94%、37.04%;对于MCF-7细胞,连翘归尾煎浓度分别为0.3mg/mL、0.5mg/mL、
7、0.7mg/mL,作用12h,凋亡率分别为16.33%、19.84%、20.52%,作用24h,凋亡率分别为22.78%、32.63%、37.33%,作用48h,凋亡率分别为29.31%、36.52%、42.73%;连翘归尾煎作用于人乳腺癌MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞,会不同程度的促进细胞的凋亡,凋亡率随作用时间增长、药物浓度增大而增高,P<0.05,数据有统计学意义。（4）对于MDA-MB-231细胞,阳性对照组
