药用植物组培技术之一---配制母液.ppt

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1、实验药用植物组织培养技术实验一培养基母液配制实验二诱导愈伤培养基配制和灭菌实验三外植体接种技术实验四接种效果观察，分化培养基配制实验五分化接种植物组织培养：在无菌和人为控制外因条件下，将离体器官、组织、细胞、胚胎或原生质体培养在人工配制的培养基上，使其脱分化产生愈伤组织，进而分化出器官并长成完整植株的方法。实验一　培养基母液的制作实验目的：（一）掌握培养基的化学组成；掌握MS培养基的配方组成；（二）熟练掌握常用培养基母液的制备方法。实验原理水分无机物质有机物质植物生长调节物质固相支持物培养基提供植物生长所需的营养成分，满足植物正常生长发育的需要。主要包括大

2、量元素所需浓度大于0.5mmol/L大量元素包括N,P,S,Ca,K,Mg。培养基中加入量最多的是N，一般以硝酸盐或氨盐。1.无机化合物微量元素植物所需的微量元素有Fe、Cu、Zn、B、Mn、AlMoCo2.有机化合物有机物质主要指维生素类物质、糖类物质。a、维生素类物质维生素类物质在酶系统中有催化功能。硫胺素（VB1）与愈伤组织的产生和生活力有关，是所有植物组织培养初期需要的维生素。盐酸吡哆醇（VB6）促进根的生长。烟酸（VB3，又称维生素PP）促进胚的发育。泛酸钙（VB5）、生物素（VH）、钴胺素（VB12）、叶酸（VBc），Vc等。b、糖类糖在培养

3、基的作用：1）、为细胞提供合成新物质的碳骨架2）、为细胞的呼吸代谢提供底物和能量3）、维持渗透压蔗糖是广泛应用的一种碳源，一般浓度1-5%。葡萄糖和麦芽糖也是常用的碳源。C.天然有机物一些天然的有机物如椰乳、番茄提取物、酵母提取物、马铃薯煮汁也常用于植物组织培养，并表现出了良好的促进作用。无机元素和有机营养构成的培养基仅保证培养物的生存与最低生理活动，只有加入植物生长调节物质，才能诱导细胞分裂、脱分化和再分化。植物生长调节剂是外源的调节植物生长发育的物质。植物激素是在植物体内合成的，对植物生长发育有显著调节作用的微量有机物。主要是生长素和细胞分裂素，有

4、时用GA3，ABA。3、植物生长调节物质生长素类：诱导细胞分裂和根的分化1）吲哚类：IAA（吲哚乙酸）、IBA（吲哚丁酸）、IPA（吲哚丙酸）2）萘酸类：NAA（萘乙酸）3）苯氧羧酸类：2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）、2,4,5-T（2,4,5-三氯苯氧乙酸）、2,4,5-TP（2,4,5-三氯苯氧丙酸）等。其中IBA和NAA广泛用于生根，并能与细胞分裂素互作促进芽的增殖。2.4-D对于愈伤组织的诱导和生长有效。A：NAA0mg/L，芽（少），根（无）B：NAA0.1mg/L，芽（少），根（无），愈伤组织（少量）C：NAA5.0mg/L，芽（少），根（

5、多），愈伤组织（一定量)ABCb.细胞分裂素是一类腺嘌呤衍生物。主要有激动素（6-糠基氨基嘌呤KT）、6-苄基氨基嘌呤（6-BA）和玉米素（ZT）等。其中最常用的是6—BA。功能：1、促进细胞的分裂和分化2、诱导芽的分化3、促进侧芽的萌发和生长4、抑制衰老ABA：6-BA(0mg/L)，芽（减少），根（增多）愈伤组织（一定量）B：6-BA(0.1mg/L)，芽（适量），根（适量）愈伤组织（一定量）如何控制植物细胞分化分裂素/生长素的比例是控制芽和根形成的一个重要条件比例高时——产生芽,比例低时——产生根c.赤霉素（GA3）1、诱导茎的细胞伸长，对矮生型植物

6、恢复成高生型特别有效，对根无效2、对生长素和细胞分裂素的活性有增效作用注：不耐热，应采用过滤灭菌加入d.脱落酸（ABA）生理作用：1、抑制蛋白质的合成2、抵消和抑制生长素、细胞分裂素、GA的作用3、诱导休眠、促进衰老和脱落（4）固化剂和悬浮剂a、固化剂琼脂、琼脂糖（用于原生质体、细胞培养及某些作物的花药培养）琼脂的用量一般在4-10g/L。琼脂以颜色浅、透明度好、洁净的为上品。b、悬浮剂Ficoll（聚蔗糖）（三）、培养基的配制试验课上讲1.贮备液（母液）的配制为什么要配制母液？1）、方便2）、准确（有些成分量太小）以MS培养基配制为例，包括大量

7、元素、微量元素、铁盐、有机物质、生长调节物质母液。注意：所有母液都要贴上标签，注明名称、配制倍数、日期，所有的母液都应保存在0~4℃冰箱中，若母液出现沉淀或霉团则不能继续使用。（四）作业（一）简述各种母液的配制方法与注意事项；（二）熟悉MS基本培养基的配方组成。