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？ｔ中图分类号密级公开ＵＤＣ学号１３３１５０５０２２？湖如中！狂学ＨｕｂｅｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｄｎｅ损±穿恆巧交ＭＡＳＴＥＲＤＩＳ民ＴＡＴＩＯＮ沈玉液汤及其拆方对２型糖尿病大鼠影响的实验研究ＥｘｅｒｉｍｅｎｔａｌＳ山ｄｏｎ化ｅｅｆｆｅｃｔｏｆＹｕｅＤｅｃｏｃｔｉｏ打ａｎｄｐｙｙｉｔｓｄｉｓａｓｓｅｍｂｌｅｄｒｅｓｃｒｉｔｉｏｎｏ打ｔｅ２ｄｉａｂｅｔｉｃｒａｔｐｐｙｐ研究生姓名；刘传苑指导教师姓名、职称；戴红教授申请学位：医学硕壬学科（专业）名称：中医诊斬学＂＂研究方向：中医证的实质研究学位类型；学术学位型Ｉ湖北中医药大学Ｉ＇二０—六年五月二十日 湖北中医药大学学位论文原创性声明本人声明：所呈交的学位论文是在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了论文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，本论文不包含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖北中医药大学或其他单位■的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均己在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：＾方麻年月曰＾７＾论的明关于学位文使用授权声论目全北、文，：本完了湖中医药大学有关保留使用学位的规定Ｐ学校有人解；可论权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅学校Ｗ公布学位文的全部或，可Ｗ根国或Ｗ用印、印他段保留学位论文；学校可据家部份内容采复缩或其手湖北省有关部口的规定送交学位论文。同意《中国优秀博硕±论文全文数据库出版章程》的内容。同意授权中国科学技术信息研究所将本人学位论文收录到《中。国学位论文全文数据库》）（论文密后遵此保密在解守规定／论文作者签名：告导师签名：Ｕ心戶曰杂＞贫瑪齐 目录中文摘要·························································ⅠAbstract·························································Ⅲ缩略词表·························································Ⅶ前言·························································1玉液汤及其拆方对2型糖尿病大鼠影响的实验研究·················31实验材料··························································31.1实验动物·······················································31.2药物与试剂·····················································31.3主要仪器与设备·················································42研究方法··························································42.12型DM大鼠模型的建立·········································42.2分组及日常处理················································52.3治疗药物的配制················································52.4治疗给药······················································52.5表征观测及基础指标测量·········································52.6标本采集及取材检测·············································62.7数据统计处理方法···············································63实验结果··························································63.1各组大鼠死亡情况···············································63.2各组大鼠总体情况比较···········································73.3各组大鼠体重变化的比较·········································73.4各组大鼠空腹血糖水平比较·······································83.5各组大鼠血脂水平比较··········································103.6各组大鼠血清胰岛素水平比较····································143.7各组大鼠炎性细胞因子水平比较··································154讨论·························································194.1中西医对于DM的认识··········································19 4.2拆方研究玉液汤················································204.32型DM大鼠模型的建立········································214.4玉液汤及其拆方对2型DM大鼠一般情况的影响····················214.5玉液汤及其拆方对2型DM大鼠空腹血糖水平的影响················254.6玉液汤及其拆方对2型DM大鼠血脂水平的影响····················264.7玉液汤及其拆方对2型DM大鼠胰岛素水平的影响··················284.8玉液汤及其拆方对2型DM大鼠炎性细胞因子水平的影响············28总结··························································32参考文献·························································35附录1文献综述··················································40附录2攻读硕士期间发表论文情况·································48致谢··························································49 中文摘要目的：通过建立2型DM大鼠模型，观察玉液汤及其两组拆方对2型DM大鼠的总体情况以及体重、空腹血糖、血脂全套、胰岛素水平、炎性细胞因子等相关指标的影响，探讨玉液汤及其两组拆方治疗2型DM作用机制以及玉液汤原方的配伍意义，为临床应用玉液汤防治DM提供理论基础和实验依据。方法：连续高脂饲料喂养4周后通过一次性腹腔注射35mg/kg的链脲佐菌素（STZ）溶液制作SD大鼠2型DM模型。造模成功后将DM大鼠随机分为模型对照组（简称模型组）、玉液汤原方组（简称原方组）、玉液汤拆方1组（简称拆方1组）、玉液汤拆方2组（简称拆方2组）、MET组（简称MET组），并设立正常对照组（简称正常组）。治疗8周后测定各组大鼠的体重、血糖，并检测血脂全套（包括TC、TG、LDL-c、HDL-c）、炎性细胞因子（包括IL-1β、IL-6、TNF-α）和胰岛素水平。结果：1.玉液汤原方组及拆方1、拆方2组大鼠的一般情况均有改善从对一般情况进行观察的结果来看，玉液汤原方组以及拆方1组、拆方2组DM大鼠的精神好转，多饮多尿症状有所改善。全部治疗结束后玉液汤原方组及拆方2组DM大鼠舌色淡红，拆方1组大鼠舌色稍暗红，MET组舌色仍较紫暗。治疗后，与模型组相比，各治疗组DM大鼠体重均有增加，其中玉液汤原方组及MET组具有非常显著性差异(P<0.01)，拆方2组具有显著性差异(P<0.05)。原方组与MET组相比，体重差异不具有统计学意义。2.玉液汤原方及拆方1、拆方2均对2型DM大鼠具有降糖效果2型DM大鼠模型制作成功时，与正常组比较，各组大鼠的空腹血糖值均显著升高(P<0.01)。治疗8周后，与模型组比较，各治疗组空腹血糖值均明显降低(P<0.01)；与MET组相比，玉液汤原方组及拆方1、拆方2组大鼠空腹血糖较高，但仅拆方1组具有统计学意义；玉液汤各组之间比I 较，玉液汤原方组与拆方1组之间差异具有统计学意义。3.玉液汤原方组及拆方1、拆方2组2型DM大鼠脂代谢异常均有所改善治疗8周后，与模型组相比，各治疗组TC、TG、LDL-c降低、HDL-c升高。其中，玉液汤原方调节脂代谢的综合效果最佳，优于两组拆方和二甲双胍，两组拆方在调节脂代谢的综合效果也略优于二甲双胍。4.玉液汤原方组及拆方1、拆方2组2型DM大鼠胰岛素水平均有所升高通过8周的药物治疗，与模型组比较，各治疗组大鼠胰岛素水平均显著升高(P<0.01)。其中玉液汤原方组和MET组的效果最为显著，二甲双胍升高血清胰岛素水平的效果明显优于玉液汤的两组拆方。5.玉液汤原方及拆方1、拆方2均能明显降低2型DM大鼠的炎症因子水平治疗8周后，与模型组比较，玉液汤原方组及拆方1、拆方2组大鼠IL-1β、IL-6、TNF-α水平均有非常明显的下降(P<0.01)，而MET组仅TNF-α水平有非常明显的下降(P<0.01)。结论：玉液汤及其2组拆方均能不同程度地改善2型DM大鼠空腹血糖、血脂和炎症因子，提高2型DM大鼠的血清胰岛素水平；虽然在降低空腹血糖和提高胰岛素水平方面，两组拆方不及二甲双胍，但在调节脂代谢及降低炎症因子水平方面，玉液汤及其两组拆方的综合效果明显优于二甲双胍；玉液汤及两组拆方对2型DM大鼠一般情况以及客观指标的影响有所不同，说明在运用复方中药防治DM的过程中，方剂君臣佐使的配伍规律具有重要意义。关键词：玉液汤；拆方；DM；实验研究II ABSTRACTExperimentalstudyontheeffectofYuyeDecoctionanditsdisassembledprescriptionontype2diabeticratSpeciality:DiagnosticsofTraditionalChineseMedicineAuthor:ChuanpengLiuTutor:HongDaiObjectives:ToobservetheeffectofYuyeDecoctionanditsdisassembledprescriptionsontherelatedindexesoftype2diabeticrats,suchasweight,bloodglucose,bloodlipids,insulinlevels,andinflammatorycytokines;ToexplorethemechanismofYuyeDecoctionanditsdisassembledprescriptionsontreatingtype2diabetes,andthecompatibilityofYuyeDecoction;ToprovidetheoreticalandexperimentalbasisforusingYuyeDecoctiontotreatdiabetes.Method:Continuoushighfatdietfor4weeks,thenreplicatethetype2diabetesmellitusmodelinSDratsthroughasingleintraperitonealinjectionwhichneed35milligramsstreptozotocin(STZ)perkilogramofweight.Type2diabeticratswererandomlyassignedtothemodelgroup,YuyeDecoctiongroup,TheNo.1disassembledprescriptionsgroup,TheNo.2disassembledprescriptionsgroup,Metformingroup,andtheblankcontrolgroup.Drugsweregivenbyintragastricadministrationtoeachgroup,onceeachdayfor8weeks.Thenmeasuretheweightandthebloodglucoseofeachrat,Andstrictlyinaccordancewiththerelevantprovisionsofthekittodetectthelevelsofafullsetofbloodlipids(includingTC,TG,HDL-C,LDL-C),inflammatorycytokines(includingIL-1beta,IL-6,TNF-alpha)andinsulin.III Results:1.BettergeneralconditionwereobservedintheYuyeDecoctiongroup,theNo.1disassembledprescriptionsgroupandtheNo.2disassembledprescriptionsgroup.After8weeksoftreatment,alloftheratsintheYuyeDecoctiongroup,theNo.1disassembledprescriptionsgroupandtheNo.2disassembledprescriptionsgroup,hadbettermentalstatethanbefore.Andtheresymptomofpolyuriaandpolydipsiawereimproved.ColoursofthetongueofratsinYuyeDecoctiongroupandtheNo.2disassembledprescriptionsgroupturnedintolightred,whilecoloursofthetongueofratsintheNo.1disassembledprescriptionsgroupturnedintoslightlydarkred,andthetongueofratsinMetformingroupwerestilldarkpurple.Aftertreatment,comparedwithmodelgroup,thetreatmentgroupofdiabeticratsincreasedinweightwhichYuyeDecoctiongroupandmetformingrouphasverysignificantdifference(P<0.01),No.2disassembledprescriptionsgrouphassignificantdifference(P<0.05).TheweightdifferencebetweentheYuyeDecoctiongroupandthemetformingroupwasnotstatisticallysignificant.2.AllofYuyeDecoction,No.1disassembledprescriptionsandNo.2disassembledprescriptionshadobvioushypoglycemiceffectontype2diabeticrats.Whenthemodeloftype2diabeticratsweresuccessfullyproduced,comparedwiththenormalgroup,thefastingbloodglucoselevelsoftheotherratsweresignificantlyincreased(P<0.01).After8weeksoftreatment,comparedwiththemodelgroup,thefastingbloodglucoselevelsofeachtreatmentgroupweresignificantlyreduced(P<0.01).ThefastingbloodglucoseofratsinYuyeDecoctiongroupandthetwodisassembledprescriptionsgroupswerehigherthanthethefastingbloodglucoseofratsinmetformingroup,butonlythedifferencebetweentheNo.1disassembledIV prescriptionsgroupandthemetformingroupwasstatisticallysignificant.ThedifferencebetweenYuyeDecoctiongroupandtheNo.1disassembledprescriptionsgroupwasalsostatisticallysignificant.3.Theabnormallipidmetabolismoftype2diabeticratsinYuyeDecoctiongroupandthetwodisassembledprescriptionsgroupswereimproved.After8weeksoftreatment,comparedwiththemodelgroup,thetotalcholesterolandthetriglyceridesandthelowdensitylipoprotein-cholesterolofeachtreatmentgroupweredecreased,thehighdensitylipoprotein-cholesterolofeachtreatmentgroupwereincreased.TheoveralleffectofYuyeDecoctiononregulatingabnormallipidmetabolismisbest,whichisbetterthanthedisassembledprescriptionsandthemetformin,andtheoveralleffectofthedisassembledprescriptionsonregulatingabnormallipidmetabolismisbetterthanthemetformin.4.Thelevelsofinsulinintype2diabeticratsofYuyeDecoctiongroupandthetwodisassembledprescriptionsgroupsweresignificantlyincreased.After8weekstreatment,comparedwiththemodelgroup,theseruminsulinlevelsofeachtreatmentgroupweresignificantlyincreased(P<0.01);TheYuyeDecoctiongroupandthemetformingrouphavethemostremarkableeffectonincreasingtheseruminsulinlevels,theeffectofthemetforminonincreasingtheseruminsulinlevelsissuperiortotheeffectofthetwodisassembledprescriptions.5.YuyeDecoctionandthetwodisassembledprescriptionscansignificantlyreducethelevelofinflammatoryfactorsinratswithtype2diabetes.After8weeksoftreatment,comparedwiththemodelgroup,thelevelsofInterleukin-1β,Interleukin-6andTumorNecrosisFactor-alphainratsofYuyeDecoctiongroupandthetwodisassembledprescriptionsgroupswereverysignificantlydecreased(P<0.01),whileonlythelevelofTumorNecrosisFactor-alphawereverysignificantlydecreased(P<0.01)InthemetforminV group.Conclusion:YuyeDecoctionandthetwodisassembledprescriptionscansignificantlyimprovethetype2diabeticrats’bloodglucose,bloodlipidandinflammatoryfactor,andcanenhancetheseruminsulinlevelsintype2diabeticrats.Althoughthetwodisassembledprescriptionswerenotasgoodasmetformininreducingfastingbloodglucoseandimprovingtheinsulinlevels,butYuyeDecoctionandthetwodisassembledprescriptionsaresuperiortometforminintheregulationoflipidmetabolismabnormalityandreducingthelevelofinflammatoryfactors.TherearealotofdifferencesbetweentheeffectofYuyeDecoctionongeneralsituationandobjectiveindexoftype2diabeticratsandtheeffectofthetwodisassembledprescriptionsongeneralsituationandobjectiveindexoftype2diabeticrats.Thisshowsthat,theprescriptioncompatibilitylawoftraditionalChineseMedicineplaysanimportantroleintheprocessofusingtraditionalChinesemedicineinthepreventionandtreatmentofdiabetes.Keywords:YuyeDecoction;disassembledprescriptions;diabetes;experimentalstudyVI 缩略词表英文缩写英文全称中文全称ADAAmericanDiabetesAssociation美国DM协会DMDiabetesMellitusDMDPNDiabeticperipheralneuropathyDM周围神经病变FFAfreefattyacid血游离脂肪酸HDL-cHighdensitylipoprotein-cholesterol高密度脂蛋白-胆固醇HFDhighfatdiet高脂饲料IL-1βInterleukin-1β白介素1βIL-6Interleukin-6白介素6InsInsulin胰岛素IRInsulinResistance胰岛素抵抗LDL-cLowdensitylipoprotein-cholesterol低密度脂蛋白-胆固醇METMetformin二甲双胍STZStreptozocin链脲佐菌素T2DMType2DiabetesMellitus2型DMTCTotalcholesterol总胆固醇TGTriglycerides甘油三酯TNF-αTumorNecrosisFactor-alpha肿瘤坏死因子αVII 前言糖尿病（DiabetesMellitus，DM）是当前威胁全球人类健康的[1]最重要的非传染性疾病之一。近年来DM发病率在全球范围内迅速升高，WHO于2014年发布的统计资料中表明全球18岁以上人群DM[2]患病率已经达到9.0%。国际糖尿病联盟（IDF）最新公布的数据显[3]示，2014年中国DM患病人数已经达到9840万，居于全球之首，其中有90%为2型糖尿病（Type2DiabetesMellitus，T2DM）。DM的相关并发症严重影响患者工作、生活，降低生命质量，已成为DM患者致死致残的主要原因，并给患者家庭和社会带来极其沉重的负担[4]。T2DM以胰岛β细胞功能减退和胰岛素抵抗（InsulinResistence,[5]IR）作为主要病理生理机制。血游离脂肪酸（FreeFattyAcid,FFA）、甘油三酯（Triglycerides,TG）及总胆固醇（TotalCholesterol,TC）的增加，被认为是2型DM患者胰岛素（Insulin,Ins）分泌减少和[6]IR的重要原因，过度分泌的白细胞介素（Interleukin,IL）和肿瘤坏死因子（TumorNecrosisFactor,TNF）等炎性细胞因子也会导致[7]胰岛β细胞分泌Ins功能受损及IR的发生，从而引发T2DM。近期的研究还发现血脂代谢紊乱和炎性细胞因子等与DM并发症也有密切[8-10]关系。可见T2DM及其并发症的发生发展不单是高血糖的问题，其防治应该是综合性的。目前临床常用的单一化学合成降糖药物虽然可以快速而精准地降低血糖，但难以兼顾DM及其并发症发病机制的多个方面。祖国传统医学将DM及其并发症归于“消渴”、“消癉”等范畴，认为其病机以阴虚为本、燥热为标，并有血瘀贯穿病程的始终，治疗以“清热润燥、养阴生津、活血化瘀”为大法，但因为消渴常并发阴损及阳等病变，治疗时可根据具体病情，加用健脾益气、温补肾阳等治法。现代药理学研究显示中医药防治DM及其并发症是通过多[11]种途径、作用于多个靶点或环节而间接实现的,运用中医复方制剂治疗DM及其并发症不仅降糖，还能全面调理人体机能，具有综合治1 [12]疗、整体调节、毒副作用小等优势。玉液汤出自《医学衷中参西录》，功擅清热润燥、益气养阴，是治疗DM的名方，一直被临床医生沿用至今；现代药理学研究发现，玉液汤中的黄芪、山药、知母、天花粉等药物单独应用就能取得良好的降糖效果，还能够调节脂代谢异常、改善血液高凝状态、改善IR、抗炎、调节免疫功能、抗氧化及抑制蛋白非酶糖基化，对于T2DM及[13]其并发症都有较好的治疗效果。本研究应用T2DM大鼠模型，对玉液汤中的君药和臣药，也是DM治疗中2组重要的药对（黄芪和山药、知母和天花粉），进行拆方研究，探讨玉液汤的君臣配伍规律和其防治T2DM的部分作用机制，以期为玉液汤防治T2DM的病证结合研究提供实验依据，进一步发挥中医药在防治DM及其并发症方面的优势。在玉液汤及其2组拆方防治T2DM及其并发症的实验研究中，我们设立正常对照组、模型组、MET组、玉液汤组及其2组拆方组，观测了所有大鼠采食量、饮水量、血糖、体重，取材称量了相关脏器湿重（包括胰腺、心脏、肾脏、肝脏），血生化法检测血脂，ELISA法检测血Ins、炎性细胞因子等指标，免疫组化方法检测心肾组织蛋白激酶C、胸主动脉蛋白非酶糖基化产物等的表达，并结合光镜、电镜技术观察了胰腺、肾脏的病理形态学和超微结构的变化，限于篇幅，本学位论文仅从各组动物总体情况、体重、空腹血糖、血脂及炎性细胞因子水平等方面进行论述。2 玉液汤及其拆方对2型糖尿病大鼠影响的实验研究1.实验材料1.1实验动物SPF级雄性SD大鼠，由华中科技大学同济医学院实验动物学部供应［许可证号：SCXK(鄂)2010－0009No．42009800000670］，6～8周龄，体重180～200g，共90只。饲养于普通笼架，每笼6只。实验环境为室温20～22℃、相对湿度40%～70%，光照周期设置成12h，自由进食、饮水。普通饲料和高脂饲料均为清洁级颗粒鼠粮，普通饲料由北京华阜康生物科技股份有限公司供应，高脂饲料（配方：普通饲料70%、猪油10%、蔗糖20%）由武汉市洪山区诚鑫动物养殖公司提供。1.2药物与试剂玉液汤由生黄芪15g、生山药30g、知母18g、花粉9g、葛根5g、五味9g、生鸡内金6g组成（参照张锡纯原方配伍，并转换为现代剂量）；玉液汤拆方1是在玉液汤原方基础上去君药生黄芪、生山药，即由知母、花粉、葛根、五味子、生鸡内金5味药构成；玉液汤拆方2是在玉液汤原方基础上去臣药知母、花粉，即由生黄芪、生山药、葛根、五味子、生鸡内金5味药构成。所有中药材均由湖北省中医院药剂科提供。盐酸二甲双胍片，规格：0.5g/片×20片/盒，中美上海施贵宝制药有限公司。链脲佐菌素（Streptozocin，STZ），美国Sigma公司产品；血脂全套检测试剂盒（宁波美康生物科技股份有限公司）；大鼠胰岛素ELISA试剂盒［RatInsulinELISA（10-1250－01）］，瑞典Mercodia公司产品；大鼠白介素1βELISA试剂盒［RatIL-1betaTissueCultureELISA（88-6010-22）］，美国eBioscience公司产品；大鼠白介素6ELISA试剂盒［RatIL-6ELISAKit（ERC003）］，欣博盛生物科技有限公司；大鼠肿瘤坏死因子αELISA试剂盒［RatTNF-αELISA（88-6010-1644）］，美国eBioscience公3 司。1.3主要仪器与设备电子动态天平（METTLERTOLEDOME802E型，瑞士梅特勒－托利多国际股份有限公司）；血糖仪及试纸（ACCU-CHEKPerforma型血糖仪及配套试纸，瑞士罗氏公司）；自动煎药包装机（QD-200A型，青岛达尔电子机械销售有限公司）；超纯水系统（AFX1-2002-PAquapro型，美国艾科浦国际有限公司）；电子分析天平（SartoriusBS110s型，德国塞多利斯公司产品）；低速台式离心机(TDL-50B型，上海安亭科学仪器厂产品)；全自动血生化分析仪（C-8000，美国雅培公司产品）；全自动酶标仪（RT-2100C，美国雷杜公司产品）。2.研究方法2.12型DM大鼠模型的建立大鼠适应性喂养3天，随机选择14只大鼠编为正常组，继续予以普通饲料喂养，其余76只大鼠均予以高脂饲料（基础饲料70%、蔗糖20%、猪油10%）喂养4周。第四周末所有大鼠均禁食不禁水12h，[14]电子动态天平称取每只大鼠体重并记录，尾部血管采血法测定每只大鼠空腹血糖并记录，正常组的14只大鼠左下腹腔注射0.1mol/L的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（pH=4.2），其余所有大鼠均按35mg/kg体重的标准，一次性左下腹腔注射1%的STZ溶液。STZ溶液须现用现配。在避光、干燥、低温的环境下用分析天平称量STZ，将其溶解于pH=4.2的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，配置成浓度1%的STZ溶液。配置好的STZ溶液在30分钟内注射完毕。腹腔注射结束后，所有大鼠均予以普通饲料及超纯水喂养，并记录24h采食量、饮水量和尿量。72h后所有大鼠禁食不禁水12h，尾部血管采血法检测空腹血糖。凡空腹血糖≥[15]11.10mmol/L且有多饮、多食、多尿者视为T2DM模型制作成功。共有75只大鼠造模成功，1只大鼠造模失败，予以淘汰。4 2.2分组及日常处理将模型建立成功的75只T2DM大鼠随机分为模型对照组（简称模型组）、玉液汤原方组（简称原方组）、玉液汤拆方1组（简称拆方1组）、玉液汤拆方2组（简称拆方2组）、二甲双胍组（简称MET组），共5组，每组15只；再加正常组14只大鼠，共6组、89只大鼠。正常组大鼠予以普通饲料及超纯水喂养，其余各组大鼠均予以普通饲料及超纯水喂养；控制室温及相对湿度，保证其在要求范围内；每日清洁动物笼架底盘、观察动物基本状态、测定每组动物采食量及饮水量并补充饲料和饮水、完成当日实验记录。2.3治疗药物的配制用研钵将盐酸二甲双胍片研为细末，加入超纯水，制取30mg/mL的二甲双胍混悬液；玉液汤及其两组拆方的配制，严格按照QD-200A型自动煎药包装机的说明书进行，将其制成生药含量1.5g/mL的浓缩液；为了在确保药品质量的前提下方便实验进行，每次药物的配制量为4天治疗用药量（充分估计损耗），并置于4℃冰箱保存。2.4治疗给药各治疗组大鼠在模型制作成功后即开始进行灌胃给药处理，每天定时灌胃1次。正常组以及模型组大鼠每次灌服生理盐水3mL，MET组大鼠每次灌服30mg/mL的二甲双胍混悬液3mL，原方组大鼠每次灌服1.5g/mL的玉液汤浓缩液3ml，拆方1组每次灌服1.5g/mL的拆方1浓缩液3mL，拆方2组每次灌服1.5g/mL的拆方2浓缩液3mL。治疗周期为8周。2.5表征观察及基础指标测量实验期间每日观察各组大鼠的精神状态、舌色、毛发、尾部、四肢、目、二便等表征，测定各组大鼠24h采食量、饮水量和尿量等；每周第一天用电子动态天平测量所有大鼠体重并记录，每单周的第一5 天测量所有大鼠空腹血糖并记录。2.6标本采集及取材检测药物干预治疗8周后，即实验第13周末，所有动物禁食不禁水12h，电子动态天平测体重，按2000mg/kg体重的剂量腹腔注射10%乌拉坦麻醉。待大鼠麻醉成功后，每只大鼠尾部血管采血法测定空腹血糖，并用摘眼球取血法取血8mL。摘眼球取血时应注意，为避免溶血，切不可用收集管刮取附着在皮毛上的血液，也不要用力挤压大鼠眼球，可以按压心脏促进血液流出。将所获得的8mL血液标本分为两部分，其中3mL血用离心机离心10min（转速设定为3500r/min）后汲取上清液，保存于4℃冰箱，并严格根据相关试剂盒要求，采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血中Ins、白介素1β（Interleukin-1β，IL-1β）、白介素6（Interleukin-6，IL-6）及肿瘤坏死因子α（TumorNecrosisFactor-α，TNF-α）水平。其余5mL血用抗凝管封存，参照血脂全套检测试剂盒说明书测定血脂全套（包括TC、TG、LDL-c、HDL-c）。2.7数据统计处理方法实验所得数据用SPSS.PASW.Statistics.v18.0.0.软件进行统计分析，多组数据之间的比较用单因素方差分析，结果都采取x±s表示。P<0.05表明具有显著性差异，P<0.01表明有非常显著性差异。3.实验结果3.1各组大鼠死亡情况实验期间，正常组大鼠死亡0只，剩余14只；模型组大鼠死亡4只，剩余11只；玉液汤原方组大鼠死亡2只，剩余13只；拆方1组大鼠死亡3只，剩余12只；拆方2组大鼠死亡2只，剩余13只；MET组大鼠死亡1只，剩余14只。6 3.2各组大鼠总体情况比较正常组大鼠，在整个实验过程中都精神良好、动作灵敏、毛色光泽，舌色均为淡红，未出现尾部及四肢溃烂等情况，体重持续稳定增加，采食量、饮水量及尿量均未见明显改变；模型组大鼠普遍表现为精神不振，动作迟钝，体毛松散且无光泽，舌色紫暗或伴有瘀斑，尾部及四肢溃烂较重，体重明显减轻，采食量、饮水量及尿量都明显增加；玉液汤原方组大鼠，精神状态与模型组相比有明显改善，舌色由紫暗逐渐转为淡红，尾部及四肢溃烂的情况明显好于模型组，体重增长，多饮多食多尿症状有所改善；拆方1组大鼠，精神状态与模型组相比略有改善，舌色由紫暗转为稍暗红，尾部及四肢溃烂情况比原方组严重，但仍好于模型组，体重普遍高于模型组，多饮多食多尿症状亦有所改善；拆方2组大鼠，精神状态与模型组相比有所改善，舌色由紫暗逐渐转为淡红，尾部及四肢溃烂情况不及原方组但优于模型组，采食量、饮水量及尿量均有不同程度降低；MET组大鼠，精神状态与模型组相比有较明显改善，但舌色仍多为紫暗，尾部及四肢溃烂情况改善不及玉液汤及两个拆方组，体重增长，采食量、饮水量及尿量均明显低于模型组。3.3各组大鼠体重变化的比较实验中，与正常组大鼠相比，模型组及各治疗组大鼠的体重降低，且均具有非常显著性差异（P<0.01）。实验第9周，与模型组大鼠比较，玉液汤原方组、拆方2组及MET组大鼠体重均有所增长，拆方2组具有显著性差异（P<0.05），原方组和MET组具有非常显著性差异（P<0.01），拆方1组大鼠体重比模型组大鼠体重略低，但差异不具有统计学意义（P>0.05）；实验第13周，与模型组大鼠比较，玉液汤原方组、拆方2组及MET组大鼠体重均有所增长，原方组和MET组具有非常显著性差异（P<0.01），拆方2组具有显著性差异（P<0.05），拆方1组大鼠体重虽较模型组大鼠体重略高，但差异不具有统计学意义（P>0.05）。整个治疗过程中，与MET组大鼠相比，拆方1组大鼠7 体重降低，具有显著性差异（P<0.05），玉液汤原方组及拆方2组大鼠体重虽不及MET组，但差异无统计学意义（P>0.05）。玉液汤各组之间比较，拆方1组大鼠体重低于拆方2组，拆方2组又低于原方组，但仅拆方1组和原方组之间具有显著性差异（P<0.05），拆方1组与拆方2组之间、拆方2组与原方组之间，差异均不具有统计学意义（P>0.05）。结果见表1。表1各组大鼠体重比较（x±s,g）体重/g组别n1周3周5周（1st）5周（3nd）9周13周正常组14176.57±10.69288.94±11.35328.82±15.70339.93±18.42449.06±38.80488.95±45.01模型组11****161.39±13.48266.77±48.27323.37±46.93299.76±43.58315.78±36.14280.61±45.57**△△**△△原方组13171.78±15.97270.27±39.44325.39±40.40297.79±33.84344.61±55.43332.92±61.30拆方1组12**@#**@#169.31±18.80300.77±49.40338.73±29.44321.65±33.57309.18±71.20290.69±54.45**△**△拆方2组13161.30±18.03287.98±30.08336.34±39.79321.92±35.64319.20±58.53300.81±77.35**△△**△△MET组14179.74±19.46285.59±31.41331.91±40.69318.49±43.43349.07±74.43350.72±87.28***△△△注：与正常组比较，P<0.05，P<0.01；与模型组比较，P<0.05，P<0.01；与MET###@@@组比较，P<0.05，P<0.01；玉液汤各组间比较，P<0.05，P<0.013.4各组大鼠空腹血糖水平比较在实验第2、3周（即高脂饲料喂养期间），与正常组大鼠对比，所有高脂饲料喂养的大鼠，空腹血糖水平均有不同程度升高，具有显著性差异（P<0.05）；造模成功后，与正常组大鼠对比，模型组及各治疗组大鼠空腹血糖水平均明显增高，具有非常显著性差异（P<0.01）；治疗第4周（即实验第9周），与正常组大鼠对比，模型组及各治疗组大鼠空腹血糖程度仍明显增高，差异非常显著（P<0.01）；实验结束取材时（即实验第13周），与正常组大鼠相比，模型组、原方组、拆方1组及拆方2组大鼠空腹血糖水平升高，具有非常显著性差异（P<0.01），MET组大鼠空腹血糖水平尽管略高于8 正常组，但差异不具有统计学意义（P>0.05）。实验第9周，与模型组大鼠对比，各治疗组大鼠空腹血糖水平均有所降低，其中MET组具有非常显著性差异（P<0.01），玉液汤原方组和拆方2组具有显著性差异（P<0.05），拆方1组不具有统计学意义（P>0.05）；实验结束取材时，与模型组大鼠相比，各治疗组大鼠空腹血糖水平均明显降低，均具有非常显著性差异（P<0.01）。实验第9周，与MET组大鼠相比，原方组、拆方1组及拆方2组大鼠空腹血糖水平均有所升高，但原方组和拆方2组差异无统计学意义（P>0.05），仅拆方1组具有非常显著性差异（P<0.01）；实验结束取材时，与MET组大鼠相比，原方组、拆方1组及拆方2组大鼠空腹血糖水平偏高，但仅拆方1组具有显著性差异（P<0.05），原方组和拆方2组差异不具有统计学意义（P>0.05）。实验第9周，玉液汤及两组拆方组之间对照，拆方1组大鼠空腹血糖水平略高于原方组和拆方2组大鼠，但差异均不具有统计学意义（P>0.05）；实验结束取材时，玉液汤及两组拆方组之间比较，原方组大鼠空腹血糖水平低于拆方2组，拆方2组又低于拆方1组，其中仅原方组和拆方1组之间差异具有统计学意义（P<0.05），原方组和拆方2组之间、拆方1组和拆方2组之间差异均不具有统计学意义（P>0.05）。结果见表2。-1表2各组大鼠空腹血糖水平比较（x±s,mmol·L）血糖/mmol·L-1组别n2周3周5周（1st）5周（3nd）9周13周正常组144.74±0.504.54±1.453.89±0.855.77±1.495.76±0.815.91±1.26模型组11****##**##7.06±0.616.50±0.494.63±0.6926.80±5.11**25.71±5.9222.74±5.86****△**△△原方组136.54±0.446.64±0.594.66±1.0126.30±7.64**19.33±3.9712.05±5.18****##**△△@#拆方1组126.53±0.656.63±0.434.44±0.7127.90±6.03**22.99±4.4314.56±8.27****△**△△拆方2组136.93±0.666.55±0.404.50±0.5426.44±8.91**19.72±8.9113.97±5.92****△△△△MET组146.64±0.506.79±0.444.60±0.8426.08±6.06**15.73±6.019.38±4.22***△△△注：与正常组比较，P<0.05，P<0.01；与模型组比较，P<0.05，P<0.01；与MET###@@@组比较，P<0.05，P<0.01；玉液汤各组间比较，P<0.05，P<0.019 3.5各组大鼠血脂（TC、TG、LDL-c、HDL-c）水平比较结果见表3-1表3各组大鼠血脂比较（x±s,mmol·L）组别例数TC/mmol·L-1TG/mmol·L-1LDL-c/mmol·L-1HDL-c/mmol·L-1△△△△△△△正常组141.56±0.471.36±0.530.44±0.981.19±0.56模型组112.67±0.24**2.77±0.98*1.12±0.46**0.44±0.13**△△##△△#△△#原方组131.61±0.331.45±0.370.45±0.070.95±0.36△#△△△#拆方1组122.02±0.641.33±1.630.72±0.181.14±0.38△△##△△##拆方2组131.73±0.691.70±0.670.53±0.160.85±0.19△△MET组142.03±0.311.99±0.600.74±0.280.71±0.16***△△△注：与正常组比较，P<0.05，P<0.01；与模型组比较，P<0.05，P<0.01；与MET###组比较，P<0.05，P<0.013.5.1各组大鼠总胆固醇（TC）水平对比治疗8周后，与正常组大鼠相比，仅模型组大鼠总胆固醇（Totalcholesterol，TC）水平明显增高，具有非常显著性差异（P<0.01），玉液汤原方组、拆方1组、拆方2组和MET组，TC水平虽然略高于正常组，但差异不具有统计学意义（P>0.05）；与模型组大鼠相比，各治疗组大鼠TC水平均有明显降低，其中原方组及拆方2组具有非常显著性差异（P<0.01），拆方1组及MET组具有显著性差异（P<0.05）；与MET组大鼠相比，玉液汤及其两组拆方组大鼠TC水平均降低，其中原方组及拆方2组具有显著性差异（P<0.05），拆方1组差异无统计学意义（P>0.05）；玉液汤及其两组拆方组之间比较，拆方2组大鼠TC水平高于原方组，而拆方1组又高于拆方2组，但差异均不具有统计学意义（P>0.05）。结果见图1。10 -1图1各组大鼠总胆固醇（TC）的对比（mml·L）***△△△注：与正常组比较，P<0.05，P<0.01；与模型组比较，P<0.05，P<0.01；与MET###组比较，P<0.05，P<0.013.5.2各组大鼠甘油三酯（TG）水平的比较治疗8周后，与正常组大鼠对比，仅模型组大鼠甘油三酯（Triglycerides，TG）水平明显增高，具有显著性差异（P<0.05），各治疗组大鼠TG水平虽然仍高于正常组，但差异不具有统计学意义（P>0.05）；与模型组大鼠相比，各治疗组大鼠TG水平均有所降低，但差异不具有统计学意义（P>0.05）；与MET组大鼠相比，玉液汤及其两组拆方组大鼠TG水平均明显降低，均有显著性差异（P<0.05）；玉液汤及其两组拆方组之间比较，原方组大鼠TG水平高于拆方1组，而拆方2组又高于原方组，但差异均不具有统计学意义（P>0.05）。结果见图2。11 -1图2各组大鼠甘油三酯（TG）的对比（mml·L）***△△△注：与正常组比较，P<0.05，P<0.01；与模型组比较，P<0.05，P<0.01；与MET###组比较，P<0.05，P<0.013.5.3各组大鼠低密度脂蛋白胆固醇（LDL-c）水平的比较治疗8周后，与正常组大鼠相比，仅模型组大鼠低密度脂蛋白胆固醇（Lowdensitylipoprotein-cholesterol，LDL-c）水平明显增高，具有非常显著性差异（P<0.01），玉液汤原方组、拆方1组、拆方2组以及MET组，LDL-c水平虽然略高于正常组，但差异不具有统计学意义（P>0.05）；与模型组大鼠相比，各治疗组大鼠LDL-c水平均有明显降低，其中原方组及拆方2组具有非常显著性差异（P<0.01），拆方1组及MET组具有显著性差异（P<0.05）；与MET组大鼠相比，玉液汤及其两组拆方组大鼠LDL-c水平均降低，其中原方组及拆方2组具有显著性差异（P<0.05），拆方1组差异无统计学意义（P>0.05）；玉液汤及其两组拆方组之间比较，拆方2组大鼠LDL-c水平低于拆方1组，原方组又低于拆方2组，但差异均不具有统计学意义（P>0.05）。结果见图3。12 -1图3各组大鼠低密度脂蛋白胆固醇（LDL-c）的比较（mml·L）***△△△注：与正常组比较，P<0.05，P<0.01；与模型组比较，P<0.05，P<0.01；与MET###组比较，P<0.05，P<0.013.5.4各组大鼠高密度脂蛋白胆固醇（HDL-c）水平的比较治疗8周后，与正常组大鼠相比，仅模型组大鼠高密度脂蛋白胆固醇（Highdensitylipoprotein-cholesterol，HDL-c）水平明显降低，具有非常显著性差异（P<0.01），玉液汤原方组、拆方1组、拆方2组以及MET组，HDL-c水平虽低于正常组，但差异不具有统计学意义（P>0.05）；与模型组大鼠相比，各治疗组大鼠HDL-c水平均有升高，但拆方2组及MET组差异无统计学意义（P>0.05），仅玉液汤原方组和拆方1组具有非常显著性差异（P<0.01）；与MET组大鼠相比，玉液汤组及拆方1、拆方2组的HDL-c水平均有所升高，且均有显著性差异（P<0.05）；玉液汤及其两组拆方组之间相比，原方组大鼠HDL-c水平高于拆方2组，而拆方1组又高于原方组，然而差异均不具有统计学意义（P>0.05）。结果见图4。13 -1图4各组大鼠高密度脂蛋白胆固醇（HDL-c）的比较（mml·L）***△△△注：与正常组比较，P<0.05，P<0.01；与模型组比较，P<0.05，P<0.01；与MET###组比较，P<0.05，P<0.013.6各组大鼠血清Ins水平的比较治疗8周后，与正常组大鼠相比较，仅有模型组大鼠血清Ins水平明显下降，具有非常显著性差异（P<0.01），各治疗组大鼠血清Ins水平虽有降低，但与正常组比较，并不具有统计学意义（P>0.05）；与模型组大鼠相比，各治疗组大鼠血清Ins水平均明显升高，具有非常显著性差异（P<0.01）；与MET组大鼠相比，玉液汤原方组及拆方1、拆方2组大鼠血清Ins水平均有所降低，但原方组差异不具有统计学意义（P>0.05），拆方1组及拆方2组均具有显著性差异（P<0.05）；玉液汤及其两组拆方组之间相互比较，拆方2组大鼠血清Ins水平高于拆方1组，而原方组又高于拆方2组，但差异均不具有统计学意义（P>0.05）。结果见表4、图5。14 -1表4各组大鼠血清胰岛素水平比较（x±s,μg·L）组别例数Ins/μg·L-1正常组142.43±0.30模型组110.08±0.04**△△原方组131.45±0.31△△#拆方1组121.12±0.20△△#拆方2组131.28±0.20△△MET组141.85±0.43***△注：与正常组比较，P<0.05，P<0.01；与模型组比较，P<0.05，△△###P<0.01；与MET组比较，P<0.05，P<0.01-1图5各组大鼠血清胰岛素水平比较（μg·L）***△△△注：与正常组比较，P<0.05，P<0.01；与模型组比较，P<0.05，P<0.01；与MET###组比较，P<0.05，P<0.0115 3.7各组大鼠炎性细胞因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）水平的比较结果见表5。-1表5各组大鼠间炎性细胞因子水平比较（x±s,pg·ml）IL-1βIL-6TNF-α组别n/pg·ml-1/pg·ml-1/pg·ml-1正常组14431.52±83.4428.74±5.8126.05±4.52模型组11813.01±67.08**75.68±25.29**68.02±11.29**△△##△△##△△##原方组13433.86±86.2731.01±5.6829.30±2.44△△#△△**△△@拆方1组12520.79±77.5041.20±15.2336.08±6.74△△#△△#*△△拆方2组13493.89±50.6539.69±16.1933.65±5.01******△△MET组14682.87±59.8858.69±11.2540.81±8.86***△△△注：与正常组比较，P<0.05，P<0.01；与模型组比较，P<0.05，P<0.01；与MET###@@@组比较，P<0.05，P<0.01；玉液汤各组间比较，P<0.05，P<0.013.7.1各组大鼠白介素1β（IL-1β）水平的比较实验结束后，与正常组大鼠相比，模型组及MET组大鼠IL-1β水平明显升高，具有非常显著性差异（P<0.01），玉液汤原方组及拆方1、拆方2组大鼠IL-1β水平也有增高，但与正常组对比，差异均不具有统计学意义（P>0.05）；与模型组大鼠相比，MET组大鼠IL-1β水平略有降低，但差异不具有统计学意义（P>0.05），玉液汤原方组及拆方1、拆方2组大鼠IL-1β水平均明显降低，且具有非常显著性差异（P<0.01）；与MET组大鼠相比较，玉液汤及其两个拆方组大鼠的IL-1β水平均明显降低，其中原方组具有非常显著性差异（P<0.01），拆方1、拆方2组具有显著性差异（P<0.05）；玉液汤及其两个拆方组大鼠之间互相比较，拆方2组大鼠IL-1β水平低于拆方1组，而原方组又低于拆方2组，但其互相之间差异均不具有统计学意义（P>0.05）。结果见图6。16 -1图6各组大鼠白介素1β（IL-1β）水平的比较（pg·ml）***△△△注：与正常组比较，P<0.05，P<0.01；与模型组比较，P<0.05，P<0.01；###与MET组比较，P<0.05，P<0.013.7.2各组大鼠之间白介素6（IL-6）水平的比较实验结束后，与正常组大鼠相比较，模型组及MET组大鼠的IL-6水平明显升高，且具有非常显著性差异（P<0.01），玉液汤原方组及拆方1、拆方2组大鼠IL-6水平也有增高，但与正常组对比，差异均不具有统计学意义（P>0.05）；与模型组大鼠相比较，玉液汤原方组及拆方1、拆方2组大鼠IL-6水平均明显降低，且均具有非常显著性差异（P<0.01），MET组大鼠IL-6水平亦略有降低，但与模型组对比，差异不具有统计学意义（P>0.05）；与MET组大鼠相比较，玉液汤及其两组拆方组大鼠的IL-6水平均有所降低，其中玉液汤原方组具有非常显著性差异（P<0.01），拆方1组差异不具有统计学意义（P>0.05），拆方2组具有显著性差异（P<0.05）；玉液汤及其两组拆方组大鼠之间相比，拆方2组大鼠IL-6水平低于拆方1组，而原方组又低于拆方2组，但各组之间差异均不具有统计学意义（P>0.05）。结果见图7。17 -1图7各组大鼠白介素6（IL-6）水平的比较（pg·ml）***△△△注：与正常组比较，P<0.05，P<0.01；与模型组比较，P<0.05，P<0.01；与MET###组比较，P<0.05，P<0.013.7.3各组大鼠之间肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平比较实验结束后，与正常组大鼠相比，其余各组大鼠TNF-α水平均有不同程度升高，但玉液汤原方组与其差异不具有统计学意义（P>0.05），拆方2组与其具有显著性差异（P<0.05），模型组、拆方1组及MET组与其均具有非常显著性差异（P<0.01）；与模型组大鼠相比，各治疗组大鼠的TNF-α水平均有显著降低，且均具有非常显著性差异（P<0.01）；与MET组大鼠相比，玉液汤及其拆方组大鼠的TNF-α水平均有所降低，但仅玉液汤原方组具有非常显著性差异（P<0.01），拆方1及拆方2组差异均不具有统计学意义（P>0.05）；玉液汤及其两组拆方组大鼠之间相互比较，拆方2组大鼠TNF-α水平低于拆方1组，而原方组又低于拆方2组，其中拆方1组和原方组之间具有显著性差异（P<0.05），拆方1组与拆方2组之间以及原方组与拆方2组之间，差异均不具有统计学意义（P>0.05）。结果见图8。18 -1图8各组大鼠肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平的比较（pg·ml）***△△△注：与正常组比较，P<0.05，P<0.01；与模型组比较，P<0.05，P<0.01；与MET###@@@组比较，P<0.05，P<0.01；玉液汤各组间比较，P<0.05，P<0.014.讨论4.1中西医对于DM的认识现代医学认为DM是由Ins分泌绝对或相对不足，及机体靶组织或靶器官对Ins敏感性降低引起的以高血糖为主要特征的代谢性疾[16]病，DM的代谢紊乱包括糖代谢紊乱和脂代谢紊乱等。由于Ins具有促进葡萄糖进入细胞、促进葡萄糖的利用以及抑制糖异生等功能，Ins缺乏会导致以糖的氧化利用减弱、糖异生增强等为主要表现的糖代谢异常；由于Ins可以促进脂肪合成和贮存，减少脂肪分解，因此Ins缺乏会导致血脂代谢异常，包括FFA在内的血脂升高，而FFA可通过干扰Ins进入胰岛敏感细胞，导致IR，进一步加重DM的发生。研究还发现，IL和TNF等细胞因子的协同作用可以引起胰岛β细胞[17]自身免疫炎症反应，加重胰岛β细胞的破坏而导致DM。可见DM的[5]发生以胰岛β细胞功能减退和IR作为主要机制，并且与血脂、炎[6-7]性细胞因子等密切相关。目前临床常用于治疗DM的药物主要有口服降糖药和Ins两大类，均可快速而精准地降低血糖，但往往难以兼19 顾DM及其并发症发病机制的多个方面。祖国医学将DM及其并发症归于“消渴”、“消癉”等范畴，认为其病变脏腑主要在肺、胃、肾，其病机主要在于阴津亏损、燥热偏盛，以阴虚为本、燥热为标，两者互[18]为因果，并有血瘀贯穿病程始终。治疗以药物治疗为主，多以“清热润燥、养阴生津、活血化瘀”为大法，但因为消渴常并发阴损及阳等病变，治疗时可根据具体病情，加用健脾益气、滋补肾阴、温补肾阳等治法。虽然与化学合成的降糖药物相比中药在降糖方面具有相对[19]的弱效性，但复方中药能通过多种途径、作用于多个靶点或环节而[11]治疗DM及其并发症，具有综合治疗、整体调节、毒副作用小等优[12]势，在DM并发症和DM前期的防治方面具有巨大潜力。4.2拆方研究玉液汤玉液汤是临床治疗DM气阴两虚型的名方，出自《医学衷中参西录》，功擅清热润燥、益气养阴。原方配伍转换为现代剂量如下：生山药30g、生黄芪15g、知母18g、生鸡内金6g、葛根5g、五味子9g、天花粉9g。《方剂学》中玉液汤的方解指出“玉液汤方中重用黄芪、山药补脾固肾，既可使清阳升而转输津液，又可使肾气摄纳而封藏精微，且能补气行血，共为君药；知母、天花粉滋阴清热，生津养液，[20]润燥止渴，共为臣药”。君臣相合，益气养阴，生津布津，既清热润燥止渴又固肾缩尿截流，且能改善血瘀状态。现代药理学研究证明，[21]黄芪、山药、知母、天花粉四味药，单独应用就有较好的降糖效果；黄芪、山药配伍，可以明显降低DM小鼠血糖水平，改善DM小鼠体重，[22]并通过发挥抗氧化及免疫调节的共同作用，防治DM；知母与天花粉合用乃“降糖药对之首”，具有起效快、持续时间长、作用强等优[23]点。方剂配伍理论认为君药是针对主病或者主证起主要治疗作用的药物，而臣药是辅助君药增强对于主病、主证疗效的药物，正如《素问·至真要大论》中云“主病之谓君，佐君之谓臣，应臣之谓使⋯⋯”[24]。作为方中的君药和臣药，黄芪、山药及知母、天花粉这两组药对是玉液汤的主体部分，本研究将其分别从玉液汤原方中拆除，采用20 T2DM大鼠模型探讨其对T2DM及其血管并发症相关指标的影响，了解君药和臣药在玉液汤原方中的药理作用，进一步揭示玉液汤防治T2DM及其并发症的作用机制，探究玉液汤配伍中君药和臣药在方中的地位和作用。4.3T2DM大鼠模型的建立目前，对于T2DM动物模型的创建，主要通过在高脂饲料（HighFat[25]Diet，HFD）喂养的基础上辅以小剂量化学药物来完成。先用高脂饲料喂养实验大鼠，造成其体内脂代谢紊乱，诱发出IR，然后一次性腹腔注射STZ，毁伤胰岛功能，使Ins分泌不足以维持正常血糖水[26]平，从而创立T2DM大鼠模型，这一方式契合T2DM的一般发病过程。STZ能对动物胰岛β细胞造成特异性杀伤，在减少Ins合成及分泌的[27]同时，很少侵害其他组织细胞，从而可以保证模型动物的高存活率。本研究中，在高脂饲料喂养4周的基础上一次性腹腔注射35mg/kg体重的STZ，3天后大鼠饮水量、采食量及尿量便明显增加，且空腹血糖到达了高于11.10mmol/L的水平，与正常组大鼠具有非常显著性差异（P<0.01），表明T2DM大鼠模型建立成功。4.4玉液汤及其拆方对T2DM大鼠一般情况的影响4.4.1玉液汤及其拆方对T2DM大鼠精神状态的影响在本研究中，通过对各组大鼠的精神状态进行观察，我们发现：正常组大鼠在整个实验过程中都精神良好，行动敏捷，毛色光泽；模型组大鼠普遍表现为精神不振，动作迟钝，体毛松散脱落较多，且无光泽；原方组大鼠，通过玉液汤进行治疗后，精神状况逐渐好转，在实验结束取材时，原方组大鼠动作灵敏，体毛整洁，色泽略差于正常组；拆方1组大鼠，拆方1灌胃处理后精神状态有所改善，在实验结束时取材时，该组大鼠有轻微脱毛现象，动作较原方组大鼠稍迟缓；拆方2组大鼠，拆方2灌胃处理后精神状态日渐好转，实验结束取材时，该组大鼠的动作灵敏度及体毛光泽与原方组大鼠无显著差别；MET21 组大鼠，通过二甲双胍灌胃治疗后精神状态有一定好转，但其体毛松散脱落的情况略多于玉液汤原方组，动作也略迟钝。中医用“神”对生命活动现象进行整体概括，并认为望神对判断疾病的轻重和预后具有重要意义，望神时应该重点观察神情、眼神、[28]气色和体态。本研究通过观察发现，各治疗组大鼠的神情、色泽、体态均明显优于模型组，其中以原方组大鼠精神状况最好，拆方2组和MET组大鼠精神状况不及原方组。据此可以初步推断，相比于二甲双胍，玉液汤在治疗DM及并发症方面具有其一定的优势；玉液汤中的君药（黄芪、山药）在方中具有重要地位，去君药后会对方剂的功效产生较大影响。4.4.2玉液汤及其拆方对T2DM大鼠“多饮、多食、多尿”症状的影响多饮、多食、多尿是T2DM的典型表现。本研究通过观察发现，玉液汤、拆方1和拆方2均能明显改善T2DM大鼠“多饮、多食、多尿”的症状，且效果都不同程度地优于二甲双胍，为相关文献中“中[7]医药治疗DM能全面调理人体机能”提供了一定的实验依据。观察发现，玉液汤原方改善2型DM大鼠“多饮、多食、多尿”症状的效果最好，去臣药（知母、天花粉）的拆方2次之，去君药（黄芪、山药）的拆方1效果相对较差。中医藏象理论认为：脾主运化，既可运化水谷，吸收精微物质，又能运化水液，是体内运湿的枢纽；肾藏精，主水，对于维持人体津液代谢平衡起着重要的作用。玉液汤以黄芪、山药为君，补气养阴、健脾固肾，可以有效改善DM大鼠多饮、多食、多尿的症状。消渴以阴虚为本燥热为标，玉液汤以知母、天花粉为臣药，滋阴清热、润燥止渴，辅助君药（黄芪、山药）进一步加强对于多饮、多食、多尿的治疗。基于本研究的观察结果，结合《方剂学》[24]对于君臣配伍规律的认识，我们不难发现：在治疗DM“多饮、多食、多尿”症状方面，玉液汤中的君药（黄芪、山药）起到了核心作用，不可或缺；臣药（知母、天花粉）能够辅助君药（黄芪、山药）22 加强治疗作用，君臣配伍后能明显提高疗效。4.4.3玉液汤及其拆方对T2DM大鼠体重的影响本研究已有的体重数据说明，玉液汤原方、拆方1、拆方2及二甲双胍均能改善T2DM大鼠体重下降的情况；其中以二甲双胍和玉液汤原方效果最佳，拆方2次之，无君药（黄芪、山药）的拆方1效果[29-30]最差。这与相关文献中黄芪、山药均能改善DM大鼠体重降低现象的结论相符合。中医认为“脾在体合肉”，肌肉的丰满与否以及体重状况都与脾密切相关；消渴日久，脾气渐渐虚弱，肌肉不能够得到充养，因而体重下降。玉液汤中用君药（黄芪、山药）补气健脾，脾气得复，气血生化有源，使得肌肉得充，而体重得以渐增。现代医学认为，在T2DM的疾病发展过程中，因为Ins不足或IR使得糖代谢紊乱，体内的葡萄糖不能被正常用来供能，蛋白质和脂肪就会作为能源[31]被机体消耗，从而引起体重下降的现象。可见Ins不足和糖代谢紊乱是引起DM体重下降的根本原因。在本研究中，玉液汤原方、拆方1、拆方2及二甲双胍，改善T2DM大鼠体重下降的效果有所差异，这可能是由于每组药物在提高T2DM大鼠Ins水平及改善糖代谢紊乱方面的作用不同所造成的。4.4.4玉液汤及其拆方对T2DM大鼠舌色的影响望舌是中医特色诊法之一，观察舌象有助于脏腑病变的诊察。正常舌色应为淡红色；淡白舌比淡红舌更浅淡，主气血两虚、阳虚证；红舌较淡红舌更红，主热证；绛舌是指比红舌更深的舌质，主热入营血、阴虚火旺；全舌呈紫色或色紫带绛，或紫中带青均为紫舌，若舌上局部出现青紫色斑点，不高出舌面者称为瘀斑或瘀点，舌色紫暗或[32]舌上有瘀斑瘀点均为瘀血内阻的表现。实验过程中观察发现，正常组大鼠舌色均为淡红，与正常人体舌色基本一致，模型组大鼠舌色多为紫暗，有些甚至出现瘀点。中医认为血瘀贯穿在消渴本病及其变证的始终。消渴初起，阴虚23 则火旺，煎熬津液，津液亏少则血液粘稠，运行不畅而成瘀，“阴虚血滞”此之谓也；消渴日久，气阴两虚，气虚则行血无力，使得血流[33]迟缓从而形成瘀血，“气虚浊留”此之谓也。现代研究则发现，各[34]型各期的T2DM患者都有血瘀的征象，瘀血不仅是DM的病理产物，[35]同时又是促使DM发展的动因，是引起DM各类并发症的主要因素。因此，“活血化瘀”治法在T2DM及其并发症的防治过程中极为重要。本研究对T2DM大鼠舌色进行观察，比对玉液汤原方、拆方1、拆方2及二甲双胍对T2DM大鼠体内血瘀情况的影响，从舌象方面较为客观地反映四组药物对T2DM及相关并发症的治疗效果。结果原方组大鼠在治疗2周后舌象便有明显改善，实验结束取材时，原方组和拆方2组大鼠舌色由最初的紫暗转为淡红，拆方1组大鼠的舌色稍暗红，而MET组大鼠舌色仍为紫暗，说明在对DM及其并发症的治疗过程中，玉液汤原方改善血瘀情况的效果最好，拆方2略次之，拆方1更次之，而二甲双胍对T2DM的血瘀情况并没有显著地改善。玉液汤中君药（黄芪、山药）益气健脾，可以加强气的行血作用，从而缓解血瘀；玉液汤中臣药（知母、天花粉）养阴清热，使津液得复，改善“阴虚血滞”状态。拆方1改善血瘀的效果次于拆方2，说明健脾益气活血对血行的影响可能要大于养阴清热活血对血行的影响，同时再次说明了君药在方剂配伍中的重要地位。玉液汤原方效果最佳，说明方剂中君药和臣药具有不同的作用和地位，君臣佐使规律在方剂配伍中具有重要意义。MET组大鼠舌色仍较紫暗，是否可以据此推测，对于T2DM的治疗二甲双胍可能改善T2DM血瘀状况的效果不佳。4.4.5玉液汤及其拆方对T2DM大鼠尾部、四肢溃烂情况的影响中医将DM足部溃疡归属于痈疽范围，认为其病机是以气阴两虚为本，以瘀血、热毒为标。气虚则行血无力，瘀血痹阻脉络，瘀久化火，再加之阴虚燥热内盛，火热互结燔灼机体，日久则皮肉腐烂而发为坏疽。玉液汤中君药（黄芪、山药）益气养阴可治痈疽之本，臣药（知母、天花粉）滋阴清热，可辅助君药以加强疗效。本研究通过观24 察发现：若去方中君药，则玉液汤对于减轻T2DM大鼠尾部、四肢溃烂的疗效大减；去臣药也会有一定的影响。现代医学认为，DM患者局部组织的溃疡、坏疽是在DM神经病变、血管病变以及感染等因素[1]配合作用下而形成的，是DM常见而又复杂的并发症。因为周围神经病变，DM大鼠的末梢神经感觉减退乃至缺失，尾部和四肢失去了自我护卫作用，特别容易受到损伤；同时自主神经病变所造成的皮肤皲裂、局部血管短路等又加重了对于尾部和足部的损害；再加上破损处容易合并感染，使得DM大鼠尾部、四肢的溃烂很难愈合。可见，观察实验动物的尾部、四肢溃烂情况，有助于掌握T2DM大鼠并发DM神经病变、血管病变等并发症的情况。在本研究中，二甲双胍对于T2DM大鼠尾部、四肢溃烂的疗效明显不及玉液汤原方，与两组拆方相比也存在差距。说明相比于二甲双胍，玉液汤及其拆方都能不同程度地防治DM神经病变、血管病变等并发症，其可能的机制在于，玉液汤及其拆方能有效改善血液循环，并能不同程度地控制感染状态。4.5玉液汤及其拆方对T2DM大鼠空腹血糖水平的影响美国DM学会（AmericanDiabetesAssociation，ADA）将空腹血糖[36]≥7.0mmol/L作为DM的诊断标准。目前为止，血糖水平的高低仍然是反映DM病情的最重要指标之一。由于高血糖所导致的多系统、多脏器并发症是DM的主要危害，不论应用何种手段，对DM的治疗都无法避开与血糖水平的关系。以往的经验及研究都证明，与现代化学合成降糖药物相比，传统[19]中药降糖具有相对的弱效性，然而控制血糖不仅是现代医学治疗DM的手段，同时也是中医治疗DM的方法之一。仝小林教授曾提出，由于现代医学的发展丰富了中医“症”的含义，客观理化指标也可以归属于中医“症”的范畴，并认为对于DM的治疗，处方用药时既要[37]能够滋阴清热，又要能够降低血糖。有文献报道：黄芪可以加强Ins敏感性，改善IR而降低血糖；山药可以抑制氧化应激，保护胰[20]岛β细胞而降糖；知母能增加肝糖原的合成、减少肝糖原的分解，25 [38]并增加骨骼肌对葡萄糖的摄取，从而降低血糖；天花粉能特异性结[39]合半乳糖，具有Ins样降血糖活性。本研究的已有的实验数据表明：玉液汤原方去君药（黄芪、山药）后降糖效果大大降低，与原方有明显差异，而原方去臣药（知母、天花粉）后降糖效果亦有所减弱。虽然知母和花粉各自都具有明确的降糖效果，但在玉液汤中所发挥的降糖作用不如君药显著，说明君药在方剂中的作用是最重要的，明显强于臣药。在本研究中，二甲双胍降低空腹血糖的疗效比玉液汤及其拆方要好，说明中药降低空腹血糖的效果的确不如化学合成的降糖药物；玉液汤原方降低空腹血糖的效果明显优于去君药（黄芪、山药）的拆方1，说明君药在降糖复方中具有重要的作用和地位，在遵循配伍规律的基础上不断改进、完善复方配伍，有助于进一步提高中药复方降糖效果。4.6玉液汤及其拆方对T2DM大鼠血脂水平的影响T2DM患者常伴有脂代谢紊乱，而脂代谢的异常也会加重患者糖[40]代谢紊乱，因而T2DM也被称作“糖脂病”。胰岛β细胞功能减退[5]和IR是激发T2DM的主要病理生理机制。FFA、TG及TC的增加，被认为是T2DM患者Ins分泌减少和IR的重要原因；另一方面，Ins不[6]足又会导致FFA及TG程度升高。同时，血脂代谢异常与DM并发症的关系也被学者们普遍关注和研究。已有的研究发现，高血糖与血脂异常所带来的毒性是DM周围神经病变（Diabeticperipheralneuropathy，DPN）的两个等位危险成分，若高血糖伴有血脂异常则会[8]加快DPN的进展；T2DM血脂代谢紊乱可以导致DM大血管病变、周[9]围血管病变以及微血管病变。可见对于T2DM患者，血脂异常的治[41]疗与高血糖的治疗同样重要。玉液汤中黄芪、山药、知母、天花粉等单味药的降脂效果已被证实。黄芪能够明显降低高脂血症大鼠的总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇，并且还能降低肝脏的脂质沉积，提高肝脏抗氧化能力，能够在降[42]低血脂水平的同时发挥对肝脏的保护作用；山药能有效降低高脂饲26 [43]料喂养的小鼠的胆固醇浓度；知母总皂苷能显著加强高脂血症大鼠的肝脏低密度脂蛋白受体活性，使血中低密度脂蛋白的清除加速，从[44][45]而起到降血脂的作用；花粉能降血脂，还能有效降低血液粘度。然而，中医复方治疗并不是简单地将有效药物叠加，而是运用中医理论分析疾病的病因病机，针对病机按照君臣佐使配伍规律遣药组[46]方。对于T2DM血脂异常的中医证侯研究成效显示，DM血脂异常多表现为本虚标实之证，气阴两虚是该病发生的内因，痰浊、瘀血等邪气是该病发展过程中极为重要的病理因素，在T2DM血脂代谢紊乱的中医证候分型当中，以痰浊阻遏证最多，气阴两虚证次之，临床辨治过程中理当着重强调益气养阴、化痰清热、活血化瘀等治法。中医认为气为血之帅，气能够推动血液运行，同时气也能够推动津液运行输布，因而对于体内有血瘀、痰浊者，可以补气行血、补气行津；“脾为生痰之源”，脾虚则水湿内停，聚而为痰，可见痰湿的生成与脾虚有密切关系，对于痰浊阻遏者可以健脾利水、燥湿化痰；阴虚也可致瘀，阴虚则火旺，煎熬津液，津液亏少则血液粘稠，运行不畅而成瘀，故而养阴清热可以降低血液粘度，促进血液运行而改善血瘀状态。玉液汤中的君药（黄芪、山药）既能益气养阴，对DM高脂血症发挥“治其本”的作用，同时又能补气行血、补气行津、健脾化痰以治其标，不论是对痰浊阻遏型还是对气阴两虚型的T2DM血脂代谢紊乱，都能起到较好的治疗作用。玉液汤中的臣药（知母、天花粉）滋阴清热润燥，虽无补气行血及健脾化痰之功，但能协助君药（黄芪、山药）以加强养阴清热之力。在本研究中，综合评价药物治疗对T2DM大鼠TC、TG、LDL-c及HDL-c水平的影响后，玉液汤原方对于T2DM血脂代谢紊乱的治疗效果最佳，玉液汤及其两组拆方调节脂代谢的综合效果要优于二甲双胍。原方去君药（黄芪、山药）的拆方1在降低TC和降低LDL-c方面的效果不如去臣药有君药（黄芪、山药）的拆方2；去臣药（知母、花粉）的拆方2在降低TG和升高HDL-c方面的效果不及去君药有臣药（知母、花粉）的拆方1；二甲双胍对T2DM血脂异常的治疗作用27 主要表现在降低TC和降低LDL-c方面。由此初步推断，黄芪、山药的益气养阴、健脾固肾作用，能有效降低T2DM血脂代谢紊乱患者的TC和LDL-c；知母、花粉所代表的滋阴清热润燥治法，能有效降低T2DM血脂代谢紊乱患者的TG水平，并升高HDL-c水平；黄芪、山药的益气养阴、健脾固肾作用可能与二甲双胍存在着相似的调节脂代谢的现代药理学机制。4.7玉液汤及其拆方对T2DM大鼠Ins水平的影响本研究利用高脂喂养联合腹腔注射STZ来诱导T2DM大鼠模型。[47]据文献报道STZ导致DM的机制可能在于：一方面STZ本身存在的类似于糖结构的部分可以与低亲和力的葡萄糖转运蛋白2结合，选择性地破坏胰岛β细胞，引起酶扩散和酶的活性改变，降低Ins分泌程度；另一方面，注射STZ后胰岛内会出现大量淋巴细胞及巨噬细胞浸润，激发胰岛的炎性改变和自身免疫过程，损害胰岛细胞，使Ins分泌不足，造成血糖升高，诱导DM的发生。玉液汤中的黄芪、山药已被证实能够保护并修复胰岛细胞，抑制胰岛细胞凋亡，从而提高Ins[48-49][50]分泌水平；而知母、花粉被认为可以通过直接促进胰岛β细胞分泌Ins来提高Ins水平。在本研究中，玉液汤及其2组拆方均能有效提高T2DM大鼠Ins水平，其机制可能在于逆转酶扩散和酶的活性改变，也可能在于调节自身免疫系统，清除体内炎性因子，保护并修复胰岛β细胞，促进胰岛细胞分泌Ins。无君药（黄芪、山药）的拆方1升高Ins水平的效果略差于无臣药（知母、天花粉）的拆方2，说明玉液汤方剂配伍中君药的重要性。拆方1和拆方2升高Ins水平的效果都明显不如二甲双胍，但按照君臣佐使规律合理配伍的玉液汤原方提升Ins水平的效果不及二甲双胍但并不存在显著差异，说明在玉液汤提升Ins水平的过程中，虽然君药（黄芪、山药）的作用占据重要地位，但臣药（知母、天花粉）的辅助作用亦不容忽视。28 4.8玉液汤及其拆方对T2DM大鼠炎性细胞因子水平的影响[51]近年来T2DM及其并发症的炎症基础逐渐引起学者关注。研究表明，T2DM与各种组织的先天性免疫系统激活有关，并且以免疫细[52-53]胞的出现和炎症因子水平升高为特征。其中，IL-1家族在调节炎[54]症反应和免疫的过程中起到中心作用，而作为重要的炎症反应中介[55]物，IL-1β的危害极大。过量的IL-6可以促进B淋巴细胞分化而产生大量的IgG，激活杀伤性T淋巴细胞，进而加速胰岛β细胞凋亡[56][57]。有研究表明，T2DM患者的高血糖状态会引起血小板功能异常和循环障碍，从而产生凝血酶和钙离子，促进TNF-α的分泌，提高TNF-α水平；而大量的TNF-α又会作用于胰岛β细胞，加重胰岛β细胞的损伤，如此循环往复，使得病情不断加重。IL-6和TNF-α还被证实存在高度正相关，可以相互影响，从不同的层次和环节干扰胰[58][10]岛功能，诱发IR，并且可以加速DM并发症的进展。可见炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的水平高低，可作为评判T2DM治疗效果的一个重要指标。研究已证实，玉液汤中益气的中药黄芪，能够抑制IL-1、IL-6、[59]TNF-α等炎性细胞因子的mRNA表达；而知母也能有效减少炎性细[60]胞因子IL-1、IL-6、TNF-α的生成。在对于IL-1β的影响方面，本研究已有的实验数据表明，玉液汤及其2组拆方都能很好降低T2DM大鼠的IL-1β水平，二甲双胍不能明显降低IL-1β水平；去君药（黄芪、山药）的拆方1降低IL-1β的效果略差于去臣药（知母、花粉）的拆方2；原方效果比两组拆方都要好。说明玉液汤在降低IL-1β方面具有化学合成的降糖药物二甲双胍不可比拟的优势；玉液汤中的君药（黄芪、山药）在降低IL-1β水平的过程中起到主要作用，辅以臣药（知母、花粉）后全方降低IL-1β的效果得到增强。在对于IL-6的影响方面，本研究已有的实验数据表明，玉液汤及其两个拆方均能显著降低T2DM大鼠的IL-6水平，玉液汤原方效果最好，而二甲双胍降低IL-6的效果不太理想；去君药（黄芪、山药）的拆方1降低IL-6的效果不如去臣药（知母、花粉）的拆方2，且与二甲双胍的疗效对比不存在显著差异；去臣药（知母、花粉）的拆29 方2降低2型DM大鼠的IL-6水平的效果明显优于二甲双胍。说明在降低IL-6水平的过程中，玉液汤中的君药（黄芪、山药）的作用至关重要，不可或缺；臣药（知母、花粉）能有效辅助君药，加强全方降低IL-6水平的效果；相比于二甲双胍，玉液汤在降低T2DM患者IL-6水平方面具有显著效果。在对于TNF-α的影响方面，本研究已有的实验数据表明，玉液汤原方、拆方1、拆方2及二甲双胍均能显著降低T2DM大鼠的TNF-α水平，其中玉液汤原方效果最佳，拆方2次之，拆方1更次之，二甲双胍相对效果最差。说明在降低TNF-α水平方面，相比于二甲双胍中药仍然具有显著效果。与无君药（黄芪、山药）的拆方1相比，玉液汤降低TNF-α的效果具有显著优势；与去臣药（知母、花粉）的拆方2相比，玉液汤在降低TNF-α方面的效果虽然也具有优势，但并不如相比于拆方1的优势明显。推测在降低T2DM患者TNF-α的过程中，玉液汤中的君药（黄芪、山药）起到了不可替代的作用，而臣药（知母、花粉）则起到了辅助君药，增强整方疗效的作用。综上所述，玉液汤能明显减少T2DM及其并发症过程中的炎性细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α，并且效果明显优于二甲双胍，这可能是中医复方治疗T2DM及其并发症的重大优势所在。玉液汤中的君药可能在减少炎性细胞因子的过程中起到了主导作用，而臣药是对君药的有力辅助。根据以上分析结果可以看出，玉液汤及其两组拆方都有助于T2DM大鼠精神状态的改善，能减轻“三多一少”的症状，减少尾部和足部溃烂的发生，同时还可以有效降低T2DM大鼠空腹血糖，调节其脂代谢紊乱，提高血中Ins水平，减少T2DM大鼠体内炎性细胞的产生。综合评价后，玉液汤的两组拆方在降低T2DM大鼠空腹血糖水平和提升Ins水平方面的效果不如二甲双胍，但是，在改善T2DM大鼠“三多一少”、尾足部溃烂等方面，以及调节T2DM大鼠脂代谢，减少T2DM大鼠体内炎性细胞因子等方面，玉液汤及2组拆方综合效果优于二甲双胍。拆方1在改善T2DM大鼠一般情况、降低大鼠空腹血糖水平、30 提升大鼠Ins水平以及降低大鼠炎性细胞因子等方面，疗效都不及拆方2。在调节T2DM大鼠脂代谢紊乱方面，拆方1和拆方2各有所长，拆方1在降低TG和升高HDL-c方面的效果更优，而拆方2在降低TC和LDL-c方面具有明显优势。综合分析后发现，在防治T2DM的过程中，玉液汤中的君药（黄芪、山药）在方中起到了主导作用，臣药（知母、花粉）对君药具有重要的辅助作用。玉液汤原方中君臣配伍严谨得当，较好地体现了中医复方制剂的君臣配伍规律，运用原方防治T2DM及并发症的疗效明显优于去除君药或臣药后的拆方。31 总结本研究已有的实验结果表明，玉液汤能有效改善T2DM大鼠的精神状态等一般状况，能在减少采食量及尿量的同时增加T2DM大鼠体重，并能明显降低空腹血糖水平，降低大鼠体内过高的TC、TG、LDL-c和升高HDL-c水平以调节体内脂代谢紊乱，同时还能提高大鼠体内Ins水平，降低IL-1β、IL-6及TNF-α等炎性细胞因子水平，从而起到较好的防治T2DM及其并发症的作用。分别由玉液汤原方去君药（黄芪、山药）、臣药（知母、天花粉）而来的拆方1、拆方2对上述指标也都有积极的影响，对T2DM及其并发症亦能有良好的治疗效果，但各方面疗效都明显不及玉液汤原方。综合评价后，无君药（黄芪、山药）的拆方1对T2DM及其并发症的治疗效果不如无臣药（知母、天花粉）的拆方2。1.玉液汤及其两组拆方均能有效改善T2DM大鼠的总体情况玉液汤原方、拆方1和拆方2都能有效改善T2DM大鼠的精神状态、舌象、尾部和足部溃烂情况，以及“多饮、多食、多尿”的临床症状。玉液汤原方改善这些情况的效果最为明显，去臣药（知母、花粉）的拆方2次之，去君药（黄芪、山药）的拆方1相对效果最差。综合评价后，相比于二甲双胍，玉液汤及其两组拆方都能更好地改善T2DM大鼠的总体情况。2.玉液汤及两组拆方均能有效增加T2DM大鼠的体重玉液汤原方、拆方1和拆方2都能有效提升T2DM大鼠的体重，改善大鼠消瘦状态。其中玉液汤原方提升体重的效果最好，去臣药（知母、花粉）的拆方2次之，去君药（黄芪、山药）的拆方1相对效果最差。二甲双胍提升T2DM大鼠体重的效果要明显优于无君药（黄芪、山药）的拆方1，说明化学降糖药物降糖作用迅速、疗效稳定。3.玉液汤及其两组拆方均能有效改善T2DM大鼠体内的糖代谢玉液汤原方、拆方1和拆方2都能有效降低T2DM大鼠的空腹血糖，能起到调节T2DM大鼠糖代谢的作用。其中玉液汤原方降低空腹32 血糖的效果最好，去臣药（知母、花粉）的拆方2略次之，无君药（黄芪、山药）的拆方1相对效果最差。二甲双胍降低T2DM大鼠空腹血糖的效果明显优于玉液汤及其两组拆方，尤其明显好于去君药（黄芪、山药）的拆方1。4.玉液汤及其两组拆方均能有效改善T2DM大鼠体内的脂代谢紊乱玉液汤原方、拆方1和拆方2都能明显降低T2DM大鼠体内过高的TC、TG和LDL-c水平，升高HDL-c水平，有效改善T2DM大鼠体内的脂代谢紊乱，从而对DM周围神经病变和DM血管病变等并发症起到防治作用。去君药（黄芪、山药）的拆方1在降低TC和降低LDL-c方面的效果不及含有黄芪和山药的拆方2；去臣药（知母、花粉）的拆方2在降低TG和升高HDL-c方面的效果不如含有知母和花粉的拆方1。综合评价后，玉液汤原方对于T2DM脂代谢紊乱的治疗效果最佳，玉液汤及其两组拆方调节脂代谢的总体效果均要优于二甲双胍。5.玉液汤及两组拆方均能有效提高T2DM大鼠Ins水平玉液汤原方、拆方1和拆方2都能明显提高T2DM大鼠的Ins水平，其中玉液汤原方提高Ins水平的效果最好，去臣药（知母、花粉）的拆方2次之，去君药（黄芪、山药）的拆方1相对效果最差。二甲双胍提高T2DM大鼠血清Ins水平的效果优于玉液汤及其两组拆方，尤其明显好于两组拆方。6.玉液汤及两组拆方均能有效改善T2DM大鼠的炎症状态玉液汤原方、拆方1和拆方2都能明显降低T2DM大鼠体内IL-1β、IL-6及TNF-α等炎性细胞因子水平，改善T2DM大鼠的炎症状态。其中玉液汤原方对IL-1β、IL-6及TNF-α的降低效果都最明显，去臣药（知母、花粉）的拆方2效果略次之，去君药（黄芪、山药）的拆方1相对效果最差。二甲双胍仅对TNF-α水平有显著降低，对IL-1β和IL-6水平并未见显著降低。玉液汤及其两组拆方降低T2DM大鼠IL-1β、IL-6及TNF-α等炎性细胞因子水平的效果均要明显优于二甲双胍。33 7.本研究的不足与展望在T2DM发病率日趋上升的今天，中药复方制剂在DM及其并发症中的作用应该得到充分发挥。运用中医药防治T2DM，虽然在降糖效果上不如化学合成的降糖药物理想，但能较全面调理人体机能、在防治并发症等方面发挥特有的优势。本研究通过建立T2DM大鼠模型，对消渴名方玉液汤进行拆方研究，旨在揭示中医复方制剂的君臣配伍规律，探讨玉液汤治疗T2DM及其并发症的作用机制，为更好地运用玉液汤防治T2DM及其并发症提供理论及实验依据，发挥玉液汤在防治DM方面的优势。通过实验研究，我们获得了较多的实验数据和结果。如能进一步对玉液汤方中的佐药、使药进行拆方研究，并对玉液汤原方中每味药物在方中的作用进行研究，将会有助于完整全面地揭示玉液汤的配伍规律和其防治T2DM及其并发症的作用机制。34 参考文献[1]中华医学会糖尿病学分会.中国2型糖尿病防治指南（2013年版）[J].中国糖尿病杂志,2014,22(8):2-42.[2]WorldHealthOrganization.GlobalHealthEstimates:DeathsbyCause,Age,SexandCountry,2000-2012.Geneva,WHO,2014.[3]吴沁璇.六味地黄汤水提醇溶部位对2型糖尿病模型大鼠肝脏PI3K/Akt信号通路的影响[D].湖南中医药大学,2015.[4]李英华，李莉，聂雪琼等.中国6省糖尿病患者糖尿病慢性并发症自报率及影响因素研究[J].中国健康教育,2014,30(1):3-6.[5]PerseghinG,PetersenK,ShulmanGl.Cellularmechanismofinsulinrecastance:potentiallinkswithinflammation[J].lntJObesRelatMetabDisord,2003,27(3):S6.[6]叶任高.内科学,第5版[M].北京:人民卫生出版社,2002:805.[7]高远,唐伟,刘超.2型糖尿病与炎症的研究进展[J]中华临床医师杂志,2010,4(9):1635-1638.[8]蒲小聘.血脂异常与糖尿病周围神经病变相关性研究[J].中西医结合心脑血管病杂志,2014,12(7):827-829.[9]张磊,王岩,齐秀英.2型糖尿病血脂异常与血管并发症的关系[J].武警医学院学报,2009,18(2):162-164.[10]任晓妹,任利群,邵华等.罗格列酮抑制糖基化终产物诱导大鼠血管平滑肌细胞钙化机制[J].中国新药与临床杂志,2011,30(4):275-279.[11]卢兆莲.中药降糖作用机理的研究进展[J].中医药导报,2009,15(11):76．[12]迟家敏主编.实用糖尿病学[M].人民卫生出版社,2010第3版.27435 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附录1：文献综述玉液汤复方及其组成药物防治糖尿病研究概况糖尿病（DiabetesMellitus，DM）是目前影响全人类健康的最[1]重要的非传染性疾病之一。近些年来全球DM发病率呈日渐上升趋势，根据国际糖尿病联盟（IDF）的预测，到2035年全世界10%的人[2][1]口将被诊断为DM患者。中华医学会糖尿病学分会（CDS）在之前的调查中发现，相比于血糖正常的人群，DM患者住院的天数、医疗费用以及就诊次数等都成倍增加。病程超过10年的DM患者的医疗费用更是达到了病程不满5年的患者医疗花费的3倍之多。在DM的发展过程中，并发症的危害非常大，严重威胁患者健康甚至生命，控制[3]并发症对于治疗DM和提高患者生活质量都有重大意义。目前临床对于DM的药物治疗仍以化学合成药物为主，通过口服降糖药物或补充胰岛素来改善胰岛素抵抗，调节胰岛素分泌相对或绝对不足，虽然可以快速而精准地降低血糖，但却难以兼顾DM及并发症发病机制的多个方面，无法达到综合性防治的效果。中医药防治DM具有悠久的历史，不仅能有效降糖，还能全面调理人体机能，具[4]有综合治疗、整体调节、毒副作用小等优势，临床疗效显著，且能[5]被选取的治疗药物种类丰富，值得推广。一、现代医学对于2型糖尿病（Type2diabetes,T2DM）及并发症的认识和治疗T2DM以胰岛β细胞功能减退和胰岛素抵抗作为主要病理生理机[6]制。研究表明，T2DM与各种组织的先天性免疫系统激活有关，并且[7-8]以免疫细胞的出现和炎症因子水平升高为特征。过度分泌的白细胞介素（IL）和肿瘤坏死因子（TNF）等炎性因子会使得胰岛β细胞分泌胰岛素的功能受到侵害，并促使胰岛素抵抗（IR）的发生，从而[9]引发DM。统计学研究发现T2DM与血脂程度和载脂蛋白的程度关系[10]密切，与健康人群相比，DM患者血清TC、TG、LDL-c水平均增高，40 [11]而HDL-c水平降低。目前治疗DM的化学合成药物主要有口服降糖药物和胰岛素两大类。口服降糖药物包括双胍类、磺脲类、格列奈类、噻唑烷二酮类(TZDs)、α-糖苷酶抑制剂类、二肽基肽酶4（DPP-4）抑制剂等。其中以盐酸二甲双胍为代表的双胍类，被CDS认为是控制T2DM高血糖[1]的一线用药，也是联合用药时的基本用药。DM并发症包括有急性并发症和慢性并发症，其中急性并发症包括DM酮症酸中毒（DKA）、高血糖高渗综合征（HHS）、DM乳酸性酸中毒等，而慢性并发症包括DM肾病（DN）、DM视网膜病变（DR）、DM神经病变、下肢血管病变、DM足等。已有的研究发现，IL-6和TNF-α[12]可以加速DM并发症的进展。血脂代谢紊乱也被证实与DM神经病变[13][14][15]和血管病变均有密切关系。赵春燕指出T2DM归并其他代谢紊乱与颈动脉内膜-中层增厚（C-IMT增厚）、DR、DN的发生相关。可见对于炎性细胞因子水平以及脂代谢紊乱的调控能够帮助治疗T2DM的[1]相关并发症。CDS指出，综合调控血糖、血压和血脂是防治DN、DR、DM神经病变、下肢血管病变等DM慢性并发症的有效措施；纯粹降低血糖并不能很好地减少T2DM患者发生心脑血管疾病的风险，然而对于血压和血脂紊乱的综合调控却可以明显降低发生DM心脑血管病变和死亡的概率。二、玉液汤原方和其方中各单味药物对T2DM及并发症的作用中医认为现代医学的DM与祖国医学中消渴的临床特征相符，认为其病因比较复杂，如禀赋不足、饮食不节、情志失调、劳欲过度等。其病变部位主要在于肺、胃、肾，病机主要是阴津亏损，燥热偏盛，[16]以阴虚为本、燥热为标，两者互为因果，治疗则应以“清热润燥，养阴生津”为大法。因为消渴常伴有血脉瘀滞、阴损及阳，容易并发眼疾、痈疽等症，治疗还需要针对患者的具体病情，合理选取活血化瘀、温补肾阳、滋补肾阴、健脾益气等相关治法。玉液汤中的黄芪、山药、知母、花粉、葛根、鸡内金、五味子等41 七味药的单独降糖作用均已被证明，部分药物还被认为具有改善血脂、控制并发症的作用。玉液汤复方在防治DM方面的应用也已被国内学者广泛关注。国内的相关报道均认为玉液汤具有降低血糖、调节脂代谢和改善[17]胰岛素抵抗的作用。有学者通过研究发现，玉液汤不单可以改善症状，还能够降低血糖，改善胰岛素抵抗，而且还具调节体内脂代谢紊[18]乱的作用。韩非通过动物实验发现玉液汤能够降低正常小鼠和四氧嘧啶造模的DM小鼠的空腹血糖，降糖率分别为21.13%(P<0.05)、33.24%(P<0.01)，其中对于正常小鼠的降糖作用在给药4h后消失，而对于DM小鼠的降糖作用可以持续到给药4h以后。并推测此方的降[19]糖机制可能是因为它能够影响机体肝糖原代谢。周卫华等认为玉液汤加减对防治高脂饮食胰岛素抵抗及临床治疗T2DM具有巨大的开发应用价值。[20-21]临床研究和动物研究都已证实黄芪多糖（APS）能改善DM的[22]物质代谢和慢性并发症。江红等通过动物研究证明了黄芪可升高T2DM大鼠血清胰高血糖素样肽-1（GLP-1）的程度，并认为（GLP-1）程度的提高可能与白细胞介素-18（IL-18）和肿瘤坏死因子-α（TNF-[23]α）相关。张定学通过临床研究发现在常规西药治疗的基础上，加用黄芪注射液可以有效治疗DN，进一步增强临床效果。动物实验研究发现山药多糖（CYP）能降低DN大鼠尿蛋白、尿素氮和肌酐水平，并下调肾脏单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）mRNA的表[24]达，提示早期应用（CYP）有预防和减轻肾脏毁伤的可能。惠秋莎[25]通过实验研究证实了山药饮料能够有效辅助降低四氧嘧啶致DM模[26]型小鼠的血糖值。而赵长英等认为山药多糖不仅可显著降低四氧嘧啶DM小鼠的血糖，且预防给药能对抗四氧嘧啶引起的小鼠血糖升高。也有研究者提出，增强糖代谢或关键酶的酶活性可能是山药多糖治疗[27]T2DM的重要机制。有学者采用STZ诱导T2DM大鼠模型的方法对中药知母的降血糖机制进行研究，结果发现知母能够有效抑制α-葡萄糖苷酶的活性，42 [28][29]从而达到降低DM大鼠空腹血糖的效果。赵子剑等通过对相关文献再评价证实了知母治疗DM的作用明确。花粉别名瓜蒌根，具有生津止渴、清热泻火、消肿排脓的功效。[30][31]现代药理实验发现花粉中的凝集素具有明显降糖作用。顾红岩等人的研究证明了瓜蒌根散能降低DM模型大鼠的血糖、血脂水平，从而起到防治T2DM及其并发症的效果。葛根具有生津止渴、升阳止泻、解肌退热的功效，也是自古以来[32]中医治疗消渴的常用药。现代药理研究证实葛根可以有效保护胰岛β细胞，改善肝脏功能，激活胰岛素受体下游AKT通路，从而降低DM小鼠血糖水平。有相关文献报道，葛根醇提物对DM模型大鼠血脂也有一定改善作用，其机制可能与调节血脂平衡，维持血管活性物质[33]动态稳定有关。鸡内金是家鸡沙囊的内膜，善消食积，能化水谷为精微。蒋长兴[34]等通过动物研究发现，鸡内金多糖能够明显降低DM高脂血症模型大鼠的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)水平和空腹血糖浓水平，说明鸡内金能在降血糖的同时调节T2DM过程中的脂代谢紊乱，因而起到防治T2DM及其并发症的作用。五味子因为五味俱全而得名，临床运用十分广泛。近期的研究显[35]示五味子油可以改善T2DM大鼠胰岛素抵抗，减轻胰岛β细胞的毁伤，增加胰岛β细胞的数量，改善其功能缺陷，增加胰岛素的分泌量，[36]从而降低血糖水平。还有文献报道五味子油对于调节T2DM大鼠体内血脂代谢紊乱的疗效良好。综上所述，目前对于玉液汤复方及方中各单味药物防治DM的相关研究，主要都集中在降糖的作用方面，且以单味药的有效成分研究居多，对于方中药物影响炎性细胞因子等T2DM并发症相关指标的研究和报道有限，特别是对于玉液汤复方防治T2DM及其并发症的机制研究，对于玉液汤的组方配伍规律则未见相关研究报道。然而，中医复方治病并不是简单地把每味药物有效成分叠加，而是基于中医理论的指导，按照君臣佐使的方剂配伍规律遣药组方。研究君药（黄芪、43 山药）和臣药（知母、花粉）在玉液汤原方中的作用、探究玉液汤的君药和臣药在方中的地位和作用，具有重要理论价值，同时有助于指导临床规范、灵活用药，对于临床运用玉液汤防治T2DM及其并发症具有重大现实意义。参考文献[1]中华医学会糖尿病学分会.中国2型糖尿病防治指南（2013年版）[J].中国糖尿病杂志,2014,22(8):2-42.[2]TriggleCR,DingH.Cardiovascularimpactofdrugsusedinthetreatmentofdiabetes.TherAdvChronicDis,2014,5(6):245-68.[3]王聪扬.针灸治疗糖尿病的文献研究[D].广州中医药大学,2011.[4]迟家敏主编.实用糖尿病学[M].人民卫生出版社,2010第3版.274-287.[5]李彦彬.中医治疗糖尿病用药规律及效果的分析研究[J].中国医药指南,2014,8(12):270-271.[6]PerseghinG,PetersenK,ShulmanGl.Cellularmechanismofinsulinrecastance:potentiallinkswithinflammation[J].lntJObesRelatMetabDisord,2003,27(3):S6.[7]Böni-SchnetzlerM,DonathMY.HowbiologicstargetingtheIL-1systemarebeingconsideredforthetreatmentoftype2diabetes[J].BrJClinPharmacol,2012,76(2):263.[8]WuLH,HuangCC,AdhikarakunnathuS.Lossoftoll-likereceptor3functionimprovesglucosetoleranceandreducesliversteatosisinobesemice[J].Metabolism,2012,61(11):1633.[9]高远,唐伟,刘超.2型糖尿病与炎症的研究进展[J]中华临床医师44 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