DB65∕T 4204-2019 绵羊幼羔体外胚胎生产技术操作规程(新疆维吾尔自治区)

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1、ICS65.020.30B43DB65新疆维吾尔自治区地方标准DB65/T4204-2019绵羊幼羔体外胚胎生产技术操作规程Technicalspecificationforinvitroembryoproductionofthelamb2019-07-01发布2019一08-01实施新疆维吾尔自治区市场监督管理局发布D865/T4204--2019目IJ本标准按照GB/T1.1一2009<<标准化工作导则第1部分:标准的结构和编写》的要求编写。本标准由新疆维吾尔自治区畜牧兽医局提出。本标准由新疆维吾尔自治区畜牧兽医局归口并组织实施。本标准由新疆

2、维吾尔自治区标准化技术委员会技术归口。本标准主要起草单位:新疆畜牧科学院生物技术研究所(新疆畜牧科学院中国一澳大利亚绵羊育种研究中心〉、新疆维吾尔自治区畜牧总站。本标准主要起草人:汪立芹、耿娟、林嘉鹏、吴阳升、韩冰、阿米娜·阿布都瓦力、秦荣艳、陈莹、李晓林、唐森、黎霞、蒋晓梅、程黎明、张建光、黄俊成。本标准实施应用中的疑问，请咨询新疆畜牧科学院生物技术研究所/新疆维吾尔自治区畜牧总站。对本标准的修改意见建议，请反馈至新疆维吾尔自治区市场监督管理局(乌鲁木齐市新华南路167号〉、新疆维吾尔自治区畜牧兽医局(乌鲁木齐市新华南路408号〉、新疆畜牧科学

3、院生物技术研究所(乌鲁木齐市经济技术开发区阿里山街468号〉、新疆维吾尔自治区畜牧总站(乌鲁木齐市新华南路408号〉。新疆维吾尔自治区市场监督管理局联系电话:0991-2817197;传真:0991-2311250;邮编:830004新疆维吾尔自治区畜牧兽医局联系电话0991-8567332;传真0991-8567332;邮编830004新疆畜牧科学院生物技术研究所联系电话0991-3075298;传真0991-3075270;邮编830000新疆维吾尔自治区畜牧总站联系电话0991-8560180;传真0991-8560180;邮编830004

4、DB65/丁4204-2019绵羊幼羔体外胚胎生产技术操作规程1范围本标准规定了绵羊幼羔供体的选择、激素处理、活体手术采卵、体外受精、体外培养等技术操作规程。本标准适用于绵羊幼羔体外胚胎生产技术操作。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。NY/T1571羊胚胎移植技术规程DB65/T4073成年绵羊体外胚胎生产技术操作规程3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1供体donor可用于体外胚胎生产、出生4周至8

5、周龄的绵羊母羔。3.2绵羊幼羔体外胚胎生产juvenileinvitroembryotransfer对绵羊幼羔使用能促进卵泡发育的激素进行处理，再通过活体采卵、体外成熟、体外受精、体外培养等一系列操作的技术。4绵羊幼羔供体的选择选择体质健壮、无疾病史、谱系清楚、体重、毛色、体型等特征符合品种要求、出生4周至8周龄绵羊母羔，作为幼羔体外胚胎生产的供体。5供体绵羊幼羔的激素处理5.1药品及器材药品及器材见附录A。5.2供体激素处理方法DB65/T4204--2019供体每天早、晚分别肌肉注射1次FSH(间隔12h)，连续注射2d，共4次，每次注射FS

6、H剂量为50单位。6供体活体手术采卵供体手术采卵过程如下:a)0术前准备:在供体注射完第4次FSH时，禁饮禁食。将手术室清洁消毒，室温维持在20C'""250C之间:b)麻醉及保定:肌肉注射静松灵O.1mL'""O.15mL，仰卧于手术架上并保定;c)备皮消毒:手术部位在离乳房前端约2cm处，腹中线两侧均可。刮毛刀刮去肥皂水湿润的手术部位羊毛，用加有新洁尔灭的消毒水清洗干净。将2%'""4%的腆酒涂抹于手术部位消毒5min,再用75%酒精对于术部位脱腆;d)手术:在手术部位覆盖手术创布并固定。避开血管，用手术刀将手术部位纵向切开3mm'""5mm

7、长的创口，使皮下结缔组织分离，暴露肌膜。用手术刀将肌膜轻轻切开，暴露肌肉层，再用刀柄后端将肌肉层和腹膜钝性分离。食指和中指从创口进入，在骨盆腔、耻骨前沿触摸子宫角，并小心地将子宫、卵巢引出创口外;e)活体采卵:用齿部包裹橡胶管的止血钳夹住卵巢系膜，预防抽卵时卵巢大量出血。将带有8号针头的10mL注射器吸取2mL'""3mL抽卵液，抽吸突出卵巢表面的卵泡，边抽吸卵泡，边0用35C盐水喷洒卵巢表面，以湿润卵巢并减少出血。回收卵泡液约6mL时，推入经抽卵液湿润的试管，放入置于3TC水浴锅内的试管架上沉淀5min'""10min。全部卵泡抽吸完后，用温盐

8、水反复冲洗卵巢、输卵管及子宫等暴露于体外的组织，在卵巢上均匀涂抹油剂青霉素后，缓慢从创口送入腹腔，向腹腔内倒入250mL甲硝瞠，以预防术