34株多重耐药铜绿假单胞菌的耐药性及β内酰胺酶基因分析

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1、34株多重耐药铜绿假单胞菌的耐药性及β内酰胺酶基因分析【关键词】铜绿假单胞菌；β内酰胺酶；多重耐药　　［Abstract］Objective:ToinvestigatedrugresistancepatternandβlactamasegenicofmultidrugresistantPseudomonasaeruginosa,soastoprovidereferenceforreasonableselectionofantimicrobials.Methods：Antimicrobialsusceptibilit

2、yethod).Theβlactamasegenes:TEM,SHV,VEB,PERcarriedonmultidrugresistantPseudomonasaeruginosaerasechainreactionmethod(PCR).Results：Theresistantratesof34strainsmultidrugPseudomonasaeruginosato12kindsofantimicrobials20.5%to100%.ThepositiverateofβlactamasegenesTEM,SH

3、V,VEB,PERexpressionaseaintypeofPseudomonasaeruginosageneinourhospital.　　［Keyonasaeruginosa;βlactamase;multidrugresistant铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa，PA)广泛分布于自然界，是临床常见的条件致病菌之一，常引起肺部、泌尿系及烧伤创面感染。近年来PA在医院感染分离菌的分离率居首位，其耐药率不断升高，对多种抗生素表现出固有或获得性耐药，对3类或3类以上抗菌药表现耐药的多重耐药(

4、multidrugresistant，MDR)的PA不断增加［1-5］。为了使临床能有效控制感染，对多重耐药菌耐药特征的研究成了人们关注的热点。现对我院2005年1月～2007年12月间部分多重耐药PA的耐药性及β内酰胺酶基因进行分析，报告如下。　　1材料和方法　　1.1材料　　1.1.1实验菌株的收集与筛选　　收集2005年1月～2007年12月我院临床微生物科分离所得的PA，利用KB法筛选出多重耐药的菌株。根据NCCLS2005年标准进行敏感、中敏、耐药的判断，3类或3类以上抗菌药物耐药的菌株判为多重耐药PA。铜绿

5、假单胞菌ATCC27853作为质控菌。共收集了34株，其中痰标本19株、尿标本2株、其他标本13株。全部细菌用法国生物梅里埃公司API鉴定系统鉴定到种。　　1.1.2仪器和材料　　温箱、低温冰箱、PCR扩增仪和电泳仪等。MullerHinton(MH)琼脂为OXOIDE公司产品。　　1.1.3抗菌药物纸片　　氨曲南(ATM)、头孢吡肟(FEP)、头孢他啶(CAZ)、头孢哌酮/舒巴坦(SCF)、头孢哌酮、亚胺培南(IPM)、庆大霉素(GEN)、阿米卡星(AMK)、环丙沙星(CIP)、左氧氟沙星(LVX)、妥布霉素、磺胺甲

6、恶唑/甲氧苄氨嘧啶(SXT)，均购自中国药品生物制品检定所。　　1.2方法　　1.2.1药敏　　根据NCCLS2005年标准，用KB法对铜绿假单胞菌进行常规药敏试验。　　1.2.2PCR检测细菌β　　内酰胺酶基因检测模板提取：挑纯培养细菌菌落少许置入50μl灭菌水中，置100℃水浴10min，8000r/min30s，上清液即为DNA模板液。根据文献［6］和基因库检索，设计引物序列如下：TEMP1：5′GAGTATTCAACATTTCCGTGTC3′，TEMP2：5′TAATCAGTGAGGCACCTATCT

7、C3′，扩增产物为535bp；SHVP1：5′TGGTTATGCGTTATATTCGCC3′，SHVP2：5′GCTTAGCGTTGCCAGTGCT3′，扩增产物为865bp；PERP1：5′ATGAATGTCATTATAAAAGC3′，PERP2：5′AATTTGGGCTTAGGGCAGAA3′，扩增产物为978bp；VEBP1：5′CGACTTCCATTTCCCGATGC3′，VEBP2：5′GGACTCTGCAACAAATACGC3′，扩增产物为961bp。引物由上海生工生物工

8、程公司合成。反应体系为：10×PCR缓冲液2.5μl，dNTP2μl，P1和P2各0.5μl，TaqDNA聚合酶1U，扩增模板液0.5μl，反应体系25μl。热循环参数为：94℃预变性5min，然后按94℃1min→55℃45s→72℃1min，共35个循环；取反应管内液体5μl与1μl电泳指示剂混匀，点样于1.2%