木犀草素对急性肺损伤的干预和保护作用

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1、木犀草素对急性肺损伤的干预和保护作用　　急性肺损伤(acutelunginjury，ALI)是由多种原因引起的以肺泡毛细血管膜通透性增高为特征的肺损伤，是临床重症监护患者主要的死亡原因，病死率达到30%～50%［1－3］。ALI病因复杂，多种疾病可并发ALI，致病环节众多，其中过度失控的炎性反应和促炎、抗炎反应失衡是该疾病的主要发病机制，炎性细胞因子和趋化因子间的复杂X络调控在启动、放大和促进病理进程中起到重大作用［4］，迄今仍无有效治疗ALI的方法和药物。木犀草属属于黄酮类化合物，因最初从木犀草科木

2、犀草属草本植物木犀草的叶、茎、枝中分离出而得名，是一种天然色素组分，具有很高的生物活性，如抗炎、抗氧化、抗肿瘤、免疫调剂、抑菌等作用［5］。木犀草素的抗炎作用与抑制炎性介质的释放与核因子κB(nuclearfactorκB，NF-κB)介导的基因表达有关。本文旨在探讨木犀草素对ALI是否有干预和保护作用及其在体内的可能作用机制。　　1材料与方法　　1．1动物健康雄性ICＲ小鼠，体重18～22g，上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，许可证号码:SCXK(沪)2008

3、-0016。饲养于室温、充分给水和食物。　　1．2试剂及药物脂多糖(LPS)(大肠杆菌O111:　B4，Sigma公司，076K4020);木犀草素(Sigma公司);地塞米松磷酸钠注射液(金陵药业股份有限公司，080201);戊巴比妥钠(国药集团化学试剂有限公司，ADZ公司)。　　1．4方法　　1．4．1实验分组和模型的制备:96只小鼠随机平均分为两批，每批随机平均分为6组，分别为正常组、模型组、木犀草素低剂量组、木犀草素中剂量组、木犀草素高剂量组及地塞米松组，每组8只。木犀草素低、中、高剂量组于造

4、模前4d分别灌胃给予25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg的木犀草素，正常组和模型组均灌胃给予相同体积的0．9%氯化钠溶液。小鼠腹腔注射1%的戊巴比妥钠(80mg/kg)后暴露气管，除正常组外，其余组气管内缓慢注入5%的LPS溶液(5mg/kg)，造成小鼠急性肺损伤，正常组以相同方式注入相同体积的0．9%氯化钠溶液。　　1．4．2肺功能相关指标的检测造模6h后，取一批小鼠腹腔注射1%的戊巴比妥钠(90mg/kg)深度麻醉，气管插管，将小鼠置于体描箱中。设置呼吸机的频率为90次/min，潮气量

5、为5ml/kg，呼吸比为15∶10。通过对动物气道压力(Press)、肺容积变化(Volume)的测量，计算出呼吸流速(Floin后取出小鼠。　　1．4．3支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞因子的测定:取另一批小鼠，造模3h后，结扎右肺，暴露气管并插管，向左肺注入4℃0．9%氯化钠溶液1ml进行支气管肺泡灌洗，重复3次。收集肺泡灌洗液并混匀，于4℃、1500r/min离心15min。收集上清液，分装后保存于－70℃超低温冰箱中，ELISA试剂盒检测检测IL-1β、IL-6和TNF-&alph

6、a;的浓度。　　1．4．4肺组织病理检测:灌洗结束后，立刻取右肺上叶以10%甲醛溶液固定，HE染色，制作常规石蜡病理切片。观察肺泡壁有无增厚、充血、炎性细胞浸润，间质有无炎症、水肿，肺泡有无坏死、出血等情况。　　1．4．5N向炎症部位聚集外，还能动员骨髓白细胞进入血液循环，同时激活内皮细胞。内皮细胞受TNF-α刺激时，释放E选素、L选择素、细胞间黏附分子1和血管黏附因子1等黏附因子，进一步诱导IL-1、IL-6、IL-8、CSF等细胞因子的分泌，共同参与炎性反应。当PMN被激活后，TNF-

7、α又能增强PMN的吞噬能力，促进PMN脱颗粒和释放溶酶体，增强PMN呼吸爆发，产生大量脂质代谢产物，破坏毛细管内皮细胞的屏障功能，增加肺毛细血管的通透性，刺激内皮细胞释放大量组织因子，同时抑制纤溶活性，损害毛细血管的抗凝功能。这些促炎因子作为重要的信号因子，进一步启动、放大和延续全身或局部炎性反应，呈现级联反应，最终导致炎症失控。本研究表明木犀草素能明显的降低了TNF-α、IL-1β和IL-6等细胞因子的含量，其中200mg/kg作用效果更显着。　　目前研究证实，与炎

8、症和免疫反应关系密切的许多细胞因子、黏附分子基因启动部位均含有核因子NF-κB位点。NF-κB对细胞因子X络具有广泛的调控作用，能够调控多种细胞因子的基因转录。NF-κB的主要形式为p50和p65组成的二聚体，p50是与DNA结合的部位，p65参与基因转录的超始调节，p65是NF-κB的主要活性形式，并可促进p50与DNA结合，当p65与细胞质内抑制蛋白IκB结合，可掩盖p50上核定位信号，仅有