谈木犀草素对急性免疫性肝损伤小鼠的保护作用

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1、谈木犀草素对急性免疫性肝损伤小鼠的保护作用木犀草素(luteolin)是一种天然黄酮类化合物，存在于多种植物中，因最初是从木犀草科(Resedaceae)木犀草属草本植物木犀草的叶、茎、枝中分离出而得名，具有多种药理活性，如抑制细菌或病毒感染导致的炎症及过敏性炎症、抗氧化和抗肿瘤等多种生物学作用。本研究主要通过探讨木犀草素对刀豆蛋白A(concanavalinA，ConA)诱导的急性肝损伤小鼠(一种被广泛应用于免疫介导的肝损伤研究的实验动物模型)的保护作用，为临床治疗免疫性肝损伤提供理论和实验依据。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1实验动物清洁级雄性C57BL/6小鼠，6～8

2、周龄，体质量20～24g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司;动物生产许可证号码为SCXK(沪)2012-0002，使用许可证号码为SYXK(沪)2012-0007。1.1.2主要试剂木犀草素(Sigma)，ConA(Vector)，苏木精、伊红染料(上海生工公司)，TUNEL检测试剂盒(Roche)，血清丙氨酸转氨酶(alanineaminotransferase，ALT)和天冬氨酸转氨酶(aspartateaminotransferase，AST)检测试剂盒(Siemens);血清肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-α，TNF-&alp

3、ha;)和γ干扰素(interferon-γ，IFN-γ)酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(RD)。　　1.2方法　　1.2.1分组和建模小鼠随机分为实验组和对照组，每组各5只，实验期间自由进食。木犀草素用DMSO溶解至储存浓度，使用前以无菌磷酸盐缓冲液(PBS)溶解至使用浓度;ConA溶解于无菌PBS中。实验组小鼠先经腹腔注射50mg/kg木犀草素，2h后重复注射1次，随后经尾静脉注射15mg/kgConA诱导建立急性肝损伤小鼠模型。对照组小鼠先经腹腔注射与实验组相同剂量的对照溶剂，2h后重复注射1次，随后经尾静脉注射15mg/kgConA建模

4、。建模后8h，水合氯醛麻醉小鼠，心脏取血，分离血清，-80℃储存待用;剖腹取小鼠肝脏组织，置于4%多聚甲醛溶液中固定。　　1.2.2肝脏组织苏木精-伊红染色(HE染色)和TUNEL检测4%多聚甲醛的肝脏用水彻底冲洗干净后，切取约5mm厚度肝组织，经乙醇逐步脱水、二甲苯透明，浸泡于石蜡与二甲苯等量混合液和石蜡液中，制备成肝脏组织的石蜡块。用切片机将蜡块切成5mm厚蜡片，并将蜡片附于涂有多聚赖氨酸的载玻片上，将载玻片放入45℃恒温箱中干燥。干燥后的切片经脱蜡及水化后进行HE染色，光学显微镜下观察肝脏组织病理学改变。采用TUNEL检测分析肝细胞凋亡情况，具体操作步骤参照试剂盒说明书。　　1.

5、2.3血清ALT、AST、TNF-α和IFN-γ水平检测采用血清ALT和AST检测试剂盒(Siemens)经全自动生化分析仪(Siemens)检测血清ALT和AST水平。按照ELISA试剂盒说明书对血清中TNF-α和IFN-γ的表达水平进行测定。　　1.3统计学方法　　采用GraphPadPrism5统计软件进行统计学分析。计量数据以珋x±s表示，两组间比较采用Student'st检验;在进行双侧的非配对Student'st检验之前，进行方差齐性分析。P<0.05表示差异有统计学意义。　　2结果　　2.

6、1血清ALT和AST水平建模后8h，对照组和实验组小鼠血清中ALT分别为(8273±538.90)U/L和(1159±273.40)U/L，AST分别为(6273±494.40)U/L和(939.1±235.40)U/L。实验组血清ALT和AST水平显著低于对照组(P<0.001)。　　2.2肝脏组织学改变和肝细胞凋亡情况对照组中央静脉周围大量炎症细胞浸润，肝小叶内有大面积坏死，可见肝细胞发生凋亡。与对照组比较，实验组小鼠肝内坏死区域明显缩小，炎症细胞浸润程度较轻，肝细胞发生凋亡情况少见。　　2.3血清TNF-α

7、和IFN-γ水平ConA能迅速激活小鼠体内的免疫细胞，随后释放出大量的细胞因子。对两组小鼠血清中TNF-α和IFN-γ表达水平的比较结果显示:对照组和实验组血清中TNF-α的质量浓度分别为(149.8±11.40)pg/mL和(56.21±27.85)pg/mL，IFN-γ的质量浓度分别为(120.90±18.87)pg/mL和(33.88&p