survivin在膀胱移行细胞癌中的表达及与dna倍体的相关性研究

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1、Survivin在膀胱移行细胞癌中的表达及与DNA倍体的相关性研究：赵瑞宁，陈福宝，杨芝红，张宁妹，师宏斌，余洋，卢冠军【摘要】　　目的探讨Survivin表达和DNA倍体分析在膀胱移行细胞癌中的临床意义及相关性。方法分别应用免疫组化(SP)法和流式细胞术对60例膀胱移行细胞癌组织及10例正常膀胱组织进行Survivin蛋白检测和DNA倍体分析。结果(1)膀胱移行细胞癌中Survivin的阳性表达率和DNA异倍体率均明显高于正常膀胱组织(P＜0.01)；(2)随着膀胱移行细胞癌病理分级、临床分期的增高，Survi

2、vin阳性表达率和DNA异倍体率均明显升高(P＜0.05或P＜0.01)；(3)在膀胱移行细胞癌中，Survivin阳性表达率和DNA异倍体率呈正相关(P＜0.01)。结论Survivin阳性表达率和DNA异倍体率与膀胱癌的发生、发展及预后密切相关。【关键词】膀胱肿瘤SurvivinDNA倍体免疫组化流式细胞术　　Abstract：ObjectiveToinvestigatetheexpressionandcorrelationofSurvivinandDNAploidyinBladderTransitional

3、Carcinoma.MethodsTheimmunohistochemistry(SPmethod)inetheexpressionofSurvivinin60casesalbladdertissues.AtthesametimethefloetryineDNAploidy.Results(1)ThepositiveexpressionratesofSurvivinandratesofDNAheteroploidinBTCCalbladdertissue(P＜0.01).(2)Thepositiveexpress

4、ionratesofSurvivinandratesofDNAheteroploidincreasedsignificantlyorigenesis，progressandprognosisofBTCC.　　Key；survivin；DNAploidy；immunohistochemistry；floetry　　肿瘤细胞与正常细胞的一个重要区别就是瘤细胞失去了节制性生长特性，而进入恶性生长状态。造成肿瘤细胞无限增殖的原因和机制非常复杂，细胞周期的失控是肿瘤发生的重要原因之一，因此细胞周期调控已成为近年来研究的热门

5、课题［1］。本研究应用免疫组化(SP)法和流式细胞术分别检测60例膀胱移行细胞癌组织和10例正常膀胱组织标本中凋亡抑制基因Survivin的表达和DNA倍体含量，旨在探讨它们在膀胱移行细胞癌中的临床意义及相关性。　　1材料与方法　　1.1一般资料　　60例膀胱癌标本取自宁夏医学院附属医院泌尿外科2005年9月至2007年2月住院治疗的膀胱癌患者，临床资料完整。男40例，女20例，年龄20～88岁，平均59.5岁。病理均为移行细胞癌，其中复发性膀胱癌11例。病理分级Ⅰ级21例，Ⅱ级22例，Ⅲ级17例。TNM分期Ti

6、s-T1期24例，T2-T4期36例。病理学指标均由病理科资深医师确定。10例正常组织标本均取自非膀胱肿瘤患者的膀胱组织。　　1.2试剂　　兔抗人Survivin多克隆抗体、即用型第二代免疫组化ElivisonTMplus广谱试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司；CycleTESTTMPLUSDNA试剂盒购自美国BD公司。　　1.3实验方法　　1.3.1Survivin蛋白的检测　　采用免疫组化(SP)法，按试剂盒说明书操作。所有标本石蜡切片均经二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，抗原修复，滴加过氧化物酶阻断液，室温下孵

7、育10min，磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗，滴加一抗，室温下孵育60min，PBS冲洗，滴加聚合物增强剂，室温下孵育20min，滴加酶标抗鼠/兔聚合物，室温下孵育30min，二氨基连苯胺(DAB)显色，苏木素复染，脱水，透明，封片，光镜下观察并摄片。以PBS代替一抗作为阴性对照；阳性对照片以福州迈新生物技术开发有限公司所赠样片为准。　　1.3.2DNA倍体分析　　采用流式细胞术，按试剂盒说明书操作。将组织块剪碎，PBS液清洗，溶血素处理，离心后制备成细胞悬液，调整细胞浓度(1×106/mL)后，分别加入CycleT

8、ESTTMPLUSDNA试剂盒中的A液、B液，用0.05%碘化丙啶染色后，上机检测进行DNA倍体分析。　　1.4结果判定　　1.4.1免疫组化法结果判定　　Survivin以细胞浆及胞核着色，有棕黄色颗粒物质沉积为阳性。参照Carcia［2］等评分方法：根据免疫组化染色深度及阳性细胞数量分别计分，其中染色深度以多数细胞呈色反应为准。按染色强度将无、弱、中、强、极强分别计0